植物细胞培养及次生物质生产.pptVIP

培养条件下植物细胞次生产物积累的特性生长偶联型产物合成与细胞生长成正比，如长春花中长春花碱的合成、烟草细胞烟碱合成、薯蓣中薯蓣皂甙的合成。中间型产物仅在细胞生长下降时合成，细胞处于指数生长期或停止生长产物都不合成，蒽醌类物质合成的植物细胞、莨菪烷类合成的植物细胞等属于此类型。非生长偶联型产物合成在细胞生长停止以后。如紫草宁。第63页，共87页，星期日，2025年，2月5日提高细胞次生产物产量的途径选择适宜的起始材料－－种类、部位栀子（Gardeniajasminoides）胚轴银杏 子叶当归 根红豆杉幼嫩的茎茜草叶柄培养基既要满足植物细胞的生物量增长，还要满足细胞合成及积累次生产物的需要。第64页，共87页，星期日，2025年，2月5日细胞平板培养（platingculture)平板培养的效果一般用植板率来衡量。植板率是能长出细胞团的单细胞在接种单细胞总和中所占的比例。每个平板形成的细胞团数植板率＝每个平板接种的细胞总数第31页，共87页，星期日，2025年，2月5日细胞平板培养(platingculture)优点：单细胞在培养基中分布均匀，便于在显微镜下对细胞进行定点观察，是单细胞株筛选和突变体筛选的常用方法。由于它具有筛选效率高、筛选量大、操作简便等优点，被广泛应用于细胞分裂、分化、生理生化、遗传变异、次生代谢产物合成等。缺点：通气状况不好，排泄物质易积累造成毒害或影响组织吸收。第32页，共87页，星期日，2025年，2月5日第33页，共87页，星期日，2025年，2月5日看护培养（nurseculture）Muir(1953)首创此法获得烟草单细胞体系。优点：简便易行，效果好。缺点：不能在显微镜下追踪细胞分裂、生长过程。第34页，共87页，星期日，2025年，2月5日第35页，共87页，星期日，2025年，2月5日微室培养(microchamberculture)在人工制造的无菌小室中，将一滴悬浮细胞液培养在少量培养基上，使其分裂增殖形成细胞团的方法。由Jones等在1960年设计的。优点：可对培养细胞连续进行显微观察，了解一个细胞的生长、分裂、分化等过程缺点：培养基少，营养和水分难以保持，pH变动幅度大，培养细胞仅能短期分裂。细胞起始密度：30～80个/室。第36页，共87页，星期日，2025年，2月5日双层滤纸植板培养Horsch等（1980）建立培养皿培养基饲养细胞层培养细胞看护滤纸转移滤纸第37页，共87页，星期日，2025年，2月5日植物细胞规模化培养意义规模化培养体系的建立生物反应器规模化培养的技术问题第38页，共87页，星期日，2025年，2月5日意义应用培养细胞系统合成有用的天然产物在医药、食品、轻化工业等领域具有重要意义。目前有约25％的法定药品来自植物，其有效成分均为次生产物。许多植物次生代谢产物是优良的食品添加剂和名贵化妆品原料。有些是生物毒素的主要来源，可用于杀虫、杀菌，而对环境和人畜无害，是理想的环保产品第39页，共87页，星期日，2025年，2月5日部分代表性植物次生产物及其植物资源工业用途次生产物植物资源医药可待因罂粟薯蓣皂苷配基三角叶薯蓣奎宁金鸡纳树地高辛狭叶毛地黄莨菪胺曼陀罗长春花碱长春花农业化学除虫菊酯除虫菊食品，饮料留兰香薄荷化妆品茉莉油茉莉花第40页，共87页，星期日，2025年，2月5日植物细胞大规模培养的技术要求 从工程的角度讲必须要进一步研究和开发适宜于植物生长和生产的生物反应器，建立最佳的控制和调节系统。从培养技术方面讲必须满足以下三个条件：培养的细胞在遗传上应是稳定的，以得到产量恒定的产物。细胞生长速度快，短时间内能生产较多产物产物不被迅速降解，最好能分泌到培养基中第41页，共87页，星期日，2025年，2月5日植物细胞规模化培养体系的建立种子细胞选择外植体高产细胞种子细胞增殖与放大培养大规模培养体系建立第42页，共87页，星期日，2025年，2月5日种子细胞选择外植体选择植物类型：遗传基础。在确定生产某一种化合物以后，首先必须准确选择那些能够产生目的化合物的植物种类及品种或单株。组织器官：由于天然产物一般为次生代谢产物，而植物次生代谢产物的积累具有组织器官的特异性，因此，在起始细胞培养时尽量选择自然状态下产生天然产物的器官、组织作为外植体。第43页，共87页，星期日，2025年，2月5日种子细胞选择高产细胞系的筛选悬浮细胞系单