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柿叶总黄酮对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化的调控机制探究

一、引言

1.1研究背景

动脉粥样硬化（Atherosclerosis，AS）是一种严重威胁人类健康的慢性心血管疾病，其发病率和死亡率在全球范围内居高不下。据世界卫生组织（WHO）统计，心血管疾病每年导致全球约1790万人死亡，占总死亡人数的31%，而动脉粥样硬化是心血管疾病的主要病理基础。动脉粥样硬化的发生发展是一个复杂的病理过程，涉及脂质代谢紊乱、炎症反应、氧化应激、内皮细胞损伤等多个环节。其主要病理特征是动脉内膜下脂质沉积、平滑肌细胞增殖、纤维帽形成以及斑块内炎症细胞浸润，最终导致动脉管腔狭窄、阻塞，引发心脑血管事件，如冠心病、心肌梗死、脑卒中等，给患者的生命健康和生活质量带来极大的影响。

载脂蛋白E（ApolipoproteinE，ApoE）是一种富含精氨酸的糖蛋白，由肝脏、巨噬细胞等多种细胞合成和分泌，在脂质代谢和转运中发挥着关键作用。ApoE作为配体与细胞表面的低密度脂蛋白受体（Low-densitylipoproteinreceptor，LDLR）及其相关蛋白结合，参与乳糜微粒（Chylomicron，CM）、极低密度脂蛋白（Very-low-densitylipoprotein，VLDL）及其残粒的代谢，对维持血浆脂质平衡至关重要。ApoE基因敲除小鼠（ApoE-/-小鼠）由于缺乏功能性ApoE蛋白，导致脂质代谢紊乱，血浆胆固醇和甘油三酯水平显著升高，在正常饮食条件下即可自发形成动脉粥样硬化病变，且病变部位和病理特征与人类动脉粥样硬化相似。因此，ApoE-/-小鼠是研究动脉粥样硬化发病机制、评价药物疗效及开发新型治疗策略的常用动物模型。

柿叶为柿树科植物柿（DiospyroskakiThunb.）的干燥叶，在我国资源丰富。传统医学认为柿叶具有止咳平喘、生津止渴、活血化瘀等功效。现代研究表明，柿叶中含有多种化学成分，如黄酮类、萜类、酚酸类等，其中黄酮类化合物是其主要活性成分。柿叶总黄酮具有抗氧化、抗炎、降血脂、保护心血管等多种药理作用。研究发现，柿叶总黄酮能够清除体内自由基，抑制脂质过氧化，减轻氧化应激对细胞的损伤；还可以调节炎症因子的表达，抑制炎症反应，从而对心血管系统起到保护作用。然而，柿叶总黄酮对动脉粥样硬化的影响及其作用机制尚未完全明确，尤其是在ApoE-/-小鼠模型中的研究相对较少。

因此，本研究旨在探讨柿叶总黄酮对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化病变的影响，并进一步阐明其作用机制，为开发治疗动脉粥样硬化的天然药物提供理论依据和实验基础。

1.2研究目的与意义

本研究旨在通过体内实验，明确柿叶总黄酮对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化病变的影响，并从脂质代谢、炎症反应、氧化应激、细胞凋亡等多个角度深入探讨其作用机制，为动脉粥样硬化的防治提供新的治疗靶点和策略。

动脉粥样硬化作为心血管疾病的主要病理基础，其发病机制复杂，涉及多种细胞和分子的相互作用。目前临床上常用的治疗药物如他汀类等虽有一定疗效，但存在不同程度的不良反应，如肝损伤、肌肉毒性等，长期使用的安全性和耐受性有待进一步提高。因此，寻找安全有效的天然药物或植物提取物来防治动脉粥样硬化具有重要的现实意义。柿叶作为一种传统的中药材，资源丰富且价格低廉，其总黄酮具有多种药理活性，在心血管疾病的防治方面展现出潜在的应用价值。研究柿叶总黄酮对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化病变的影响及机制，不仅有助于揭示其在动脉粥样硬化防治中的作用靶点和信号通路，为开发新型的抗动脉粥样硬化药物提供理论依据，还能为拓展柿叶的药用价值、推动天然药物的研究与开发提供实验支持。同时，本研究也将丰富对动脉粥样硬化发病机制的认识，为心血管疾病的防治策略提供新的思路和方法。

1.3研究方法与创新点

本研究综合运用多种研究方法，从整体动物水平、细胞水平和分子水平对柿叶总黄酮抗动脉粥样硬化作用及其机制进行深入探讨。

在动物实验方面，采用实验法和对比法，以ApoE基因敲除小鼠为研究对象，将其随机分为模型组、柿叶总黄酮低剂量组、柿叶总黄酮高剂量组和阳性对照组（如辛伐他汀组），同时设立正常对照组（野生型小鼠）。通过灌胃给予不同剂量的柿叶总黄酮或阳性药物，正常对照组和模型组给予等体积的生理盐水，连续干预一定时间（如12周）。期间定期检测小鼠体重、饮食量和饮水量，观察一般状态。实验结束后，采集血液和组织样本，运用生化检测法测定血清脂质水平（如总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇）、炎症因子（如肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6等）、氧化应激指标（如超氧化物歧化酶、丙二醛、谷胱甘肽过氧化物酶）等；采用组织病理学方法，对主