禽白血病病毒J亚群与B亚群的分离鉴定及核酸探针制备技术研究.docxVIP

禽白血病病毒J亚群与B亚群的分离鉴定及核酸探针制备技术研究

一、引言

1.1研究背景与意义

禽白血病（AvianLeukosis，AL）是由禽白血病病毒（AvianLeukosisVirus，ALV）引起的禽类多种肿瘤性疾病的统称，给养鸡业带来了巨大的经济损失。ALV属于反转录病毒科禽α反转录病毒属，其基因组为单股正链RNA，病毒粒子形态不规则，总体直径80-120nm，平均90nm，呈球形，在干燥条件易扭曲成精子状、弦月状或其他形状。该病毒对热不稳定，高温下很快失活，只有在-60℃以下时，才能存活数年并保持感染力，在pH5-9稳定，在此范围外则迅速失活，且因其有脂质囊膜，所以对脂溶性试剂敏感。

根据病毒与宿主细胞特异性相关的囊膜蛋白的抗原性，ALV可分为A、B、C、D、E、F、G、H、I和J十个亚群，自然感染鸡群的主要是A、B、C、D、E和J六个亚群，其中A、B、C、D和J亚群具有致病性，而E亚群通常是非致病性的或者致病性很弱。鸡的ALV还可分为外源性ALV和内源性ALV，外源性ALV不会通过宿主细胞染色体传递，包括A、B、C、D和J亚群，致病性强的鸡ALV都属于外源性病毒，它们既能在细胞与细胞间以完整的病毒粒子形式在个体与群体间通过直接接触或污染物发生横向传染，也能以完整的病毒粒子形式通过鸡胚从种鸡垂直传染给后代。内源性ALV的前病毒cDNA可整合进宿主细胞染色体基因组、并能稳定遗传，因而可通过染色体垂直传播，它可能只是基因组的不完全片断，不会产生传染性病毒，一般也与致病性无关，但也可能是全基因组因而能产生传染性病毒，不过这类病毒通常致病性很弱或没有致病性，目前发现的能产生传染性病毒的内源性ALV都属于E亚群。

在20世纪80年代前，A和B亚群是鸡群中最常见的引起淋巴白血病和其他类型肿瘤的ALV。80年代末期发现的J亚群ALV主要引起鸡的髓样细胞瘤，自1988年英国首次从肉用型鸡群中分离出J亚群ALV后，该病毒已迅速蔓延到许多国家。实验室和田间试验表明，ALV-J仅引起肉用型鸡发生肿瘤，主要是髓细胞瘤，最早可在5周龄引起发病，平均为9周龄，肿瘤致死率在20周龄最高。我国于1999年首次从白羽肉鸡中发现ALV-J，随后在蛋鸡群中也检测到该病毒的感染，给我国养鸡业造成了严重的经济损失。

禽白血病病毒的感染会导致鸡群出现多种症状，严重影响鸡的健康和生产性能。感染鸡可能会出现内脏肿瘤，导致死亡，成年鸡的死亡率可达1.2%，偶尔甚至高达20%。ALV感染还会引起生长迟缓，使鸡的生长速度明显减慢，无法达到正常的生长标准，这不仅影响了鸡的出栏体重和经济效益，也降低了鸡群的整体品质。感染鸡还会出现免疫抑制的情况，导致其免疫系统功能下降，对其他病原体的抵抗力减弱，容易继发感染其他疾病，进一步加重鸡群的病情和损失。产蛋下降也是常见的症状之一，感染ALV的蛋鸡产蛋量会显著减少，蛋品质也会下降，如出现畸形蛋增多等问题，这对蛋鸡养殖产业的经济效益产生了直接的负面影响。

禽白血病的传播途径主要包括垂直传播和水平传播。垂直传播是指阳性鸡通过产卵将病原体传播到下一代，这使得病毒能够在鸡群中持续传播，难以彻底清除。水平传播则主要发生在孵化期和孵化后的前两周，鸡出壳后接触和啄食周围环境中的病毒，或者通过与感染鸡的直接接触而感染。孵化设施和工具的污染是导致水平传播的重要因素之一，如孵化盘、孵化车等如果没有进行严格的消毒，就可能成为病毒传播的媒介。鸡群在育雏期和产蛋期的饲养管理方式也会影响水平传播的发生，如鸡群密度过大、饲养环境卫生条件差等，都有利于病毒的传播。

目前，禽白血病的防控面临着诸多挑战。由于该病主要以垂直传播为主，很难通过常规的疫苗接种等方法进行有效控制。虽然可以通过检测和淘汰阳性鸡等措施来控制病毒的传播，但这些方法需要耗费大量的人力、物力和财力，且实施过程较为复杂。目前市场上缺乏有效的治疗药物，一旦鸡群感染了禽白血病病毒，很难进行有效的治疗，只能采取淘汰病鸡等措施来防止疾病的进一步传播。

禽白血病病毒的准确检测和鉴定对于疾病的防控至关重要。传统的检测方法如病毒分离鉴定、聚合酶链式反应（PCR）、酶联免疫吸附试验（ELISA）、间接免疫荧光检测技术（IFA/FA）等，虽然在一定程度上能够检测出病毒的存在，但都存在各自的局限性。病毒分离鉴定方法周期长、操作复杂、费用高，不适用于病毒的快速检测，更无法在临床上实现高通量检测；ELISA检测方法适合大规模检测，但假阳性高，仍需进一步确定病毒是否为目标亚群；IFA检测准确性高，但需要荧光显微镜等实验器材，限制了