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济南市手足口病患者中肠道病毒71型的深度剖析：从分离鉴定到VP1蛋白原核表达

一、引言

1.1研究背景与意义

手足口病（Hand,FootandMouthDisease，HFMD）是一种全球性的传染病，在儿童群体中尤为常见。该疾病主要由多种肠道病毒引起，临床表现为手、足、口腔等部位出现疱疹或溃疡，同时可能伴有发热、咳嗽、流涕等症状。多数患者病情较轻，可在一周内自愈，但部分患者可能发展为重症，出现无菌性脑膜炎、脑干脑炎、神经源性肺水肿及急性迟缓性瘫痪等严重并发症，甚至导致死亡，对儿童的身体健康和生命安全构成了严重威胁。

肠道病毒71型（Enterovirus71，EV71）属于小RNA病毒科肠道病毒属，是引发手足口病的主要病原体之一。自1969年首次从美国加利福尼亚州的一名患有中枢神经系统症状的患者粪便中分离出EV71以来，全球多个国家和地区都曾报道过由EV71引起的手足口病疫情的大规模暴发。1997-1998年，马来西亚和中国台湾地区的疫情尤为严重，大量儿童感染，其中部分患者因重症而死亡，引起了广泛的关注。此后，EV71在亚太地区，如日本、新加坡、越南等地频繁流行，成为公共卫生领域的重点关注对象。在中国，自2008年安徽省阜阳市发生手足口病疫情大规模暴发后，EV71的流行态势愈发严峻。根据中国疾病预防控制中心的数据，2008-2022年期间，全国累计报告手足口病病例超过数百万例，其中由EV71感染导致的重症和死亡病例占比较高。2009年，全国手足口病病例数达到数十万例，死亡病例数百例；2012年，病例数进一步上升，达到高峰，死亡病例也随之增加。这些数据表明，EV71感染已成为我国亟待解决的公共卫生问题之一。

在济南地区，手足口病同样是儿童常见的传染病。据济南市疾病预防控制中心的统计数据显示，2010-2022年期间，济南市每年报告的手足口病病例数在数千例至数万例之间波动。其中，EV71阳性率在不同年份有所差异，但总体上呈现出较高的水平。2010年，EV71阳性率为23.51%；2011年，阳性率上升至39.95%；2012-2022年期间，虽然阳性率有所波动，但仍维持在一定水平。这些数据说明，EV71在济南地区的手足口病流行中占据重要地位，是导致重症和死亡病例的主要病原体之一。例如，在2011年的手足口病疫情中，济南市某医院收治了多名重症手足口病患儿，其中大部分患儿的病原体检测结果为EV71阳性。这些患儿出现了高热、抽搐、呼吸困难等症状，经过积极治疗，部分患儿仍留下了不同程度的后遗症。

EV71感染的防控形势严峻，目前临床上对EV71感染的治疗主要以对症治疗为主，缺乏特效的抗病毒药物。因此，研制安全有效的疫苗和早期诊断试剂盒成为防控EV71感染的关键措施。通过对EV71的分离鉴定和分子生物学研究，可以深入了解其基因特征、变异规律和进化趋势，为疫苗和诊断试剂的研发提供重要的理论依据。原核表达技术作为一种高效、简便的蛋白质表达系统，在病毒蛋白的表达和研究中具有广泛的应用。通过原核表达EV71的VP1蛋白，可以获得大量高纯度的蛋白，用于疫苗的研发、诊断试剂的制备以及免疫学研究等，为EV71感染的防控提供有力的技术支持。

对济南市手足口病患者肠道病毒71型进行分离鉴定与VP1蛋白的原核表达研究具有重要的现实意义。这不仅有助于深入了解济南地区EV71的流行特征和分子生物学特性，为手足口病的防控提供科学依据，还能够为疫苗和诊断试剂的研发奠定基础，对保障儿童的身体健康和生命安全具有重要的作用。

1.2国内外研究现状

自1969年EV71被首次分离以来，国内外学者围绕其展开了广泛而深入的研究，涵盖了病毒的分子生物学特性、流行病学特征、致病机制以及防控措施等多个领域。

在分子生物学特性研究方面，国外学者较早地对EV71的基因组结构进行了解析。研究发现，EV71的基因组为单股正链RNA，全长约7.4kb，包含5非编码区（5-UTR）、开放阅读框（ORF）和3非编码区（3-UTR）。ORF编码一个约2200个氨基酸的多聚蛋白，该多聚蛋白在病毒蛋白酶的作用下，裂解为结构蛋白（VP1-VP4）和非结构蛋白（2A-2C、3A-3D）。其中，VP1蛋白是病毒衣壳的主要组成部分，具有高度的免疫原性，其基因序列的变异与病毒的抗原性、毒力以及传播能力密切相关。国内学者在此基础上，进一步对我国流行的EV71毒株的基因特征进行了深入分析。通过对不同地区、不同年份分离的EV71毒株的VP1基因序列进行测定和比对，发现我国流行的EV71毒株主要属于C4亚型，且在进化过