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2025/07/19
大肠杆菌300-3000MPNL菌悬液制备步骤
汇报人：_1751851681
CONTENTS
目录
01
实验前准备
02
菌悬液制备过程
03
制备过程中的关键步骤
04
注意事项与质量控制
05
菌悬液的应用与存储
实验前准备
01
实验材料与设备
准备实验耗材
包括无菌试管、移液管、培养皿等，确保实验过程中的无菌操作。
配置实验设备
准备恒温培养箱、显微镜、离心机等设备，保证实验的准确性和重复性。
实验环境准备
实验室清洁与消毒
确保实验台面、设备和工具无菌，使用适当的消毒剂进行彻底清洁。
实验材料准备
准备所需的培养基、试管、移液管等实验材料，并进行灭菌处理。
实验人员防护
实验人员需穿戴适当的防护装备，如实验服、手套和护目镜，以防交叉污染。
环境温湿度控制
调整实验室温度至适宜范围（通常为20-25°C），并保持相对湿度稳定，以保证实验准确性。
安全措施与注意事项
个人防护装备的使用
实验人员需穿戴适当的个人防护装备，如实验服、手套和护目镜，以防止菌液接触皮肤和眼睛。
无菌操作技术
在制备菌悬液过程中，必须严格遵守无菌操作规程，避免污染样本和实验环境。
废弃物处理
实验结束后，正确处理所有使用过的培养基和菌液，确保废弃物通过高温高压灭菌后安全处置。
菌悬液制备过程
02
菌种活化与培养
选择合适的培养基
选择适合大肠杆菌生长的LB培养基，确保菌种能有效活化。
接种与培养条件
在无菌条件下将菌种接种到培养基中，设定适宜的温度和时间进行培养。
观察菌落生长情况
定期观察培养基中的菌落形态和生长密度，判断菌种是否成功活化。
避免污染与交叉污染
在操作过程中采取措施，如使用无菌技术，防止其他微生物污染和交叉污染。
菌悬液浓度调整
使用分光光度计测定
通过分光光度计测量菌悬液的吸光度，根据标准曲线计算出实际浓度。
稀释法调整浓度
根据目标浓度，使用无菌生理盐水对菌悬液进行适当稀释，以达到所需的MPNL值。
菌悬液的分装与标记
准备实验耗材
包括无菌试管、移液管、培养皿等，确保实验过程中无菌操作。
配置实验设备
准备恒温培养箱、显微镜、离心机等设备，保证实验顺利进行。
制备过程中的关键步骤
03
确保无菌操作
使用分光光度计测量
通过分光光度计测定菌悬液的光密度，以确定其浓度是否符合300-3000MPNL的要求。
稀释或浓缩菌悬液
根据测量结果，适当稀释或浓缩菌悬液，以达到所需的300-3000MPNL浓度范围。
浓度测定方法
个人防护装备的使用
实验人员需穿戴适当的个人防护装备，如实验服、手套和护目镜，以防止菌液接触皮肤和眼睛。
生物安全柜的操作
所有操作应在生物安全柜内进行，确保实验环境的无菌状态，防止交叉污染。
废弃物的处理
实验后，所有使用过的培养基和菌悬液应按照生物危害废弃物处理规程进行消毒和处置。
菌悬液的均匀性检验
选择合适的培养基
选择适合大肠杆菌生长的LB培养基，确保菌种能够有效活化。
接种与培养条件
在无菌条件下将大肠杆菌接种到培养基中，设定适宜的温度和时间进行培养。
观察菌落生长情况
定期观察培养基上的菌落形态，确保菌种生长良好，无污染。
收获菌体
当菌落达到适当密度时，收获菌体，准备进行下一步的菌悬液制备。
注意事项与质量控制
04
操作过程中的注意事项
实验室清洁与消毒
确保实验室表面无尘无菌，使用适当的消毒剂进行彻底清洁，为实验提供无菌环境。
实验器材的准备
准备所需的无菌培养皿、移液管、试管等器材，并进行高压灭菌处理，保证实验器材的无菌状态。
实验人员的个人防护
实验人员需穿戴适当的防护装备，如实验服、手套和口罩，以防止交叉污染。
实验室内温湿度控制
调节实验室内的温度和湿度至适宜范围，以保证大肠杆菌菌悬液制备过程中的微生物活性。
菌悬液质量控制标准
准备实验耗材
包括无菌试管、移液管、培养皿等，确保实验过程中的无菌操作。
配置实验设备
准备恒温培养箱、显微镜、离心机等设备，保证实验顺利进行。
菌悬液的应用与存储
05
菌悬液的短期与长期存储
使用分光光度计测量
通过分光光度计测定菌悬液的吸光度，以确定其浓度是否符合300-3000MPNL的要求。
稀释或浓缩操作
根据测量结果，通过添加培养基稀释或使用离心浓缩的方法调整菌悬液至目标浓度范围。
菌悬液的应用范围
个人防护装备的使用
实验人员需穿戴适当的个人防护装备，如实验服、手套和护目镜，以防止菌液接触皮肤或眼睛。
生物安全柜的操作
在制备菌悬液时，所有操作应在生物安全柜内进行，以确保实验环境的无菌状态和实验人员的安全。
废弃物的处理
实验结束后，所有使用过的培养基、菌液和实验器材应按照生物安全规定进行高压灭菌处理，然后丢弃。
THEEND
谢谢
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