TGXAS-八角茴香真伪快速鉴别 实时荧光PCR法.docxVIP

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CCS

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团体标准

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FORMTEXT八角茴香真伪快速鉴别

实时荧光PCR法

FORMTEXTQuickidentificationofauthenticityofanisistellatifructus

Real-timePCRmethod

FORMDROPDOWN

FORMTEXT2025年7月11日

FORMDROPDOWN

FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX发布

FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX实施

FORMTEXT广西物品编码与标准化促进会??发布

STYLEREF标准文件_文件编号T/?????XXXX—XXXX

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前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由广西-东盟食品检验检测中心[国家市场监督管理总局技术创新中心（天然香料香精）]提出。

本文件由广西物品编码与标准化促进会归口。

本文件起草单位：广西—东盟食品检验检测中心[国家市场监督管理总局技术创新中心（天然香料香精）]、玉林市食品药品检验检测中心、广州双螺旋基因技术有限公司、广西民生中检联检测有限公司、广西壮族自治区标准技术研究院、广电计量检测（南宁）有限公司。

本文件主要起草人：李锐、陈宇、王海波、邓玉秀、巫坚、卢森华、樊文研、韦涛、张璜、陈灏挺、戴向东、韦春梦、韦兰青、陆柔、黄海霞、杨尚超、韦升坚、谢庆剑、钟超凡、卢艺、赵刚、苏周雯、黄漫漫、杜妮。

八角茴香真伪快速鉴别

实时荧光PCR法

范围

本文件规定了八角茴香（anisistellatifructus）真伪快速鉴别的实时荧光PCR方法。

本文件适用于八角茴香的原果、碎体及粉末真伪的实时荧光PCR鉴定。

检出限（LOD）5%（质量分数）。

规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测

术语、定义和缩略语

术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

八角茴香（anisistellatifructus）

为木兰科植物八角茴香（IlliciumverumHook.f.）的干燥成熟果实。

实时荧光PCRReal-timePCR

在PCR反应体系中加入荧光基团，通过荧光信号的积累实时监控整个PCR扩增过程。

Ct值cyclethreshold

每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。

缩略语

下列缩略语适用于本文件。

DNA：脱氧核糖核酸（Deoxyribonucleicacid）

PVP-40:聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinylpyrrolidone)

CTAB:十六烷基三甲基溴化铵(Cetyltrithylammoniumbromide)

RNase:核糖核酸酶(Ribonuclease)

TE:三羟甲基氨基甲烷乙二胺四乙酸(TrisEDTA)

OD:光密度值(Opticaldensity)

原理

使用基于硅胶柱纯化技术和CTAB前处理方式提取植物源性成分的特异核苷酸片段，以八角DNA为模板，利用八角物种特异性引物及探针进行实时荧光PCR扩增检测，同时设置阳性、阴性及空白对照。根据PCR扩增反应产物荧光信号及扩增曲线判定，实现对样品中植物源性成分的定性分析

试剂和材料

除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂。实验用水符合GB/T6682中一级水的要求。所有试剂均用无DNA酶污染的容器分装。

检测用引物和探针

引物和探针序列见表1

引物和探针序列

引物名称

序列

基因来源

verum-1-F

TCGATGGTCCCTTGAGGAGTA

NCBI

verum-1-R

GCGCCGATGTTGGTTGTT

NCBI

verum-1-P

FAM-A