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神经生长因子联合顺铂诱导人肺腺癌细胞株A549凋亡的机制研究

一、引言

1.1研究背景

肺癌，作为全球范围内发病率和死亡率均位居前列的恶性肿瘤，严重威胁着人类的生命健康。据世界卫生组织国际癌症研究机构（IARC）发布的2020年全球最新癌症负担数据显示，当年中国肺癌新发病例高达82万，死亡病例71万，其发病率和死亡率远高于其他癌种。在我国，肺癌的形势也极为严峻，男性肺癌发病率和死亡率占据所有癌症的首位，且近年来发病率呈明显上升趋势。

肺癌主要分为非小细胞肺癌（NSCLC）和小细胞肺癌（SCLC）两大类，其中NSCLC约占所有肺癌的80%-85%，包括腺癌、鳞状细胞癌和大细胞癌等。NSCLC癌细胞生长分化较慢，扩散转移相对较晚，但多数患者确诊时已处于晚期，手术治疗效果及预后较差，因此化疗成为主要治疗手段。然而，化疗效果受多种因素制约，如肿瘤细胞的耐药性、化疗药物的毒副作用等，使得化疗的疗效不尽人意。

顺铂（cisplatin，DDP）作为一线广谱抗癌药物，是治疗NSCLC的主要药物之一。它通过与DNA形成交联，干扰DNA复制和转录，进而抑制肿瘤细胞的增殖。但随着铂类为主化疗药物的广泛应用，部分化疗患者因肿瘤细胞对顺铂产生耐药性而导致化疗失败。研究发现，在耐顺铂人肺腺癌细胞H460/CIS中，Bcl-2表达水平显著增高，提示Bcl-2可能与顺铂耐药相关。但在耐顺铂SCLC细胞H69/CP中，Bcl-xl和Bax表达均增高，而Bcl-2表达反而下降，且顺铂对Bcl-2磷酸化几乎无影响，表明顺铂耐药机制较为复杂。

神经生长因子（nervegrowthfactor，NGF）是神经营养因子家族的重要成员，最初被发现主要参与神经系统的发育、维持神经元的存活和促进轴突生长等。近年来研究发现，NGF在多种肿瘤细胞中也有表达，并且对肿瘤细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭等生物学行为产生影响。有研究表明，NGF可以抑制某些肿瘤细胞的生长，其机制可能与诱导细胞凋亡、调节细胞周期等有关。但NGF在肺癌治疗中的作用及机制尚未完全明确，尤其是NGF联合顺铂对肺癌细胞凋亡的影响研究相对较少。

在肺癌治疗面临诸多困境的现状下，探寻新的治疗策略或药物联合方案至关重要。研究NGF联合顺铂对人肺腺癌细胞株A549凋亡的影响，有望为肺癌的治疗提供新的思路和理论依据，为改善肺癌患者的治疗效果和预后带来新的希望。

1.2研究目的和意义

本研究旨在深入探究神经生长因子联合顺铂对人肺腺癌细胞株A549凋亡的影响及其潜在机制。通过一系列实验，明确NGF与顺铂联合使用时，对A549细胞生长抑制、凋亡诱导等方面的具体作用，以及在分子水平上对相关凋亡调控基因和蛋白表达的影响。

肺癌严重威胁人类生命健康，顺铂作为主要化疗药物却面临耐药问题，而NGF在肺癌治疗中的作用机制不明。本研究对肺癌治疗具有重要意义，一方面，若能证实NGF联合顺铂可显著诱导A549细胞凋亡，将为肺癌化疗提供新的联合用药方案，有助于克服顺铂耐药，提高化疗效果，改善患者预后；另一方面，深入揭示其作用机制，能为肺癌的靶向治疗和药物研发提供新的理论依据，推动肺癌治疗领域的发展。

二、相关理论基础

2.1神经生长因子（NGF）

2.1.1NGF的结构与特性

神经生长因子（NGF）是神经营养因子家族中最早被发现和深入研究的成员。1952年，Levi-Montalcini和Cohen首次从小鼠颌下腺中成功提取并鉴定了NGF。此后，随着研究的不断深入，人们对NGF的结构与特性有了更全面的认识。

从分子结构上看，NGF是一种由α、β、γ三种亚基组成的7S复合物。其中，β亚基是具有生物活性的核心部分，它是由两个相同的118个氨基酸残基组成的同源二聚体。β-NGF的每个单体含有三对分子内二硫键，这些二硫键对于维持β-NGF的空间构象和生物学活性至关重要。通过X射线衍射技术分析发现，NGF单体分子呈长形，由两条反向平行的β折叠形成。分子的上、中、下三个区域分别由芳香性残基和三对二硫键起主导作用。单体的上部是三个β发夹环，中部是二硫键核心，底部在58-68残基区域有三个相邻的反向转角，而转角区的众多可变残基可能是与特异受体作用的关键位点。

在理化性质方面，NGF在生理条件下相对稳定。它在pH值为7.2-7.4的环境中能保持较好的活性。但NGF对温度较为敏感，高温会导致其蛋白质结构发生变性，从而失去生物学活性。一般来说，NGF在低温条件下，如-20℃或更低温度保存时，其活性