细菌药敏试验及其耐药表型检测.pptVIP

**肉汤稀释法4 8 16 3264128256ug/ml混混清抗生素倍比稀释，种菌105CFU/ml，孵育35℃，16～20h，判读。第29页，共80页，星期日，2025年，2月5日**肉汤稀释法调节离子浓度的MH肉汤宏量肉汤法（2ml,13x100mm） 微量肉汤法（0.1ml,微量板）自动化仪优点：准确，可靠，可用于研究。缺点：劳动强度大细菌生长情况不可查第30页，共80页，星期日，2025年，2月5日**琼脂稀释法浓度16 32 64128256ug/ml制备含对倍抗生素浓度梯度的平板，制备菌悬液，点种菌，104/每个点，孵育，判读结果第31页，共80页，星期日，2025年，2月5日**琼脂稀释法优点：金标准精确可靠可同时测定多株菌（40株）细菌生长情况可查缺点：测多个药时劳动强度大制备平皿费时费力第32页，共80页，星期日，2025年，2月5日Etest法E试条是一条5mm×50mm的无孔试剂载体，一面固定有一系列预先制备的，浓度呈连续指数增长稀释抗菌药物，另一面有读数和判别的刻度；抗菌药物的梯度可覆盖有20个MIC对倍稀释浓度的宽度范围；将E试条放在细菌接种过的琼脂平板上，经孵育过夜，围绕试条明显可见椭圆形抑菌圈，圈的边缘与试条交点的刻度浓度即为抗菌药物抑制细菌的最小抑菌浓度。第33页，共80页，星期日，2025年，2月5日*wanghui-ART*Etest法细菌生长区Etest塑料条椭圆形细菌生长抑制区2561288016判读抑菌浓度（MICug/ml)第34页，共80页，星期日，2025年，2月5日Etest法菌液制备及接种均同纸片扩散法。90mm平板上可放E试验试条1～2条，140mm平板最多可放6条。孵育温度及时间同纸片扩散法。第35页，共80页，星期日，2025年，2月5日**Etest法优点连续浓度梯度，与琼脂稀释法相关性好影响因素少，稳定性高操作简单，省时缺点：昂贵用途：快生长菌，苛养菌，厌氧菌，酵母菌，分枝杆菌第36页，共80页，星期日，2025年，2月5日**评价药物体外抗菌活性的指标MIC50,MIC90,MIC均值，MIC范围，R，I，SMIC50/MIC90：MIC从小到大排列，位于第50/90百分位菌株的MIC值单纯比较MIC50，MIC90是片面的，还要同时看平均MIC及MIC范围同时结合R，I，S，(不同药物血浓度不同，安全范围不同)第37页，共80页，星期日，2025年，2月5日细菌耐药机制

细菌耐药机制主要有四种：产生一种或多种水解酶、钝化酶和修饰酶；抗生素作用的靶位改变，包括青霉素结合蛋白位点、DNA解旋酶、DNA拓扑异构酶Ⅳ的改变等；细菌膜的通透性下降，包括细菌生物被膜的形成和通道蛋白丢失；细菌主动外排系统的过度表达。在上述耐药机制中，第一、二种耐药机制具有专一性，第三、四种耐药机制不具有专一性。第38页，共80页，星期日，2025年，2月5日Β-内酰胺酶β内酰胺酶是一类水解青霉素、头孢菌素类抗生素的灭活酶；该酶位于革兰阳性球菌菌体外，革兰阴性杆菌间质中；检测方法有微生物培养法、碘－淀粉法、头孢硝噻吩纸片法。其中头孢硝噻吩纸片法因为简单、方便、快速，应用于临床检测。第39页，共80页，星期日，2025年，2月5日

葡萄球菌属–青霉素

方法敏感中介耐药MIC?0.12?g/ml-?0.25?g/ml纸片扩散法?29mm-?28mmCLSIM100-S20.Table2C.第40页，共80页，星期日，2025年，2月5日诱导β-内酰胺酶的检测如果青霉素的药敏结果出现以下情况，需要做诱导β-内酰胺酶的检测：MIC≤0.12μg/mlZonediameter≥29mm第41页，共80页，星期日，2025年，2月5日诱导β-内酰胺酶试验苯唑西林(诱导剂)接种纯菌落于琼脂上(例如，BAP,MHA)；贴?-内酰胺类纸片(例如,苯唑西林,头孢西丁)；孵育过夜；测试抑菌圈周围的细菌；如果β-内酰胺酶阳性,报告青霉素R。PosNeg第42页，共80页，星期日，2025年，2月5