细胞化学染色POX.pptxVIP

细胞化学染色沧州医专医学技术系侯振江

细胞化学染色，是一种以形态为基础，结合运用化学或生物化学技术对血细胞内各种化学成分作定位、定性及半定量分析的方法。用于研究血细胞生理、病理和化学结构；临床上为某些血液病的诊断、鉴别诊断、疗效观察、预后监测和发病机制的探讨，提供重要依据。010302

血细胞化学染色的基本要求是在原位显示细胞成分和结构，反应产物应是有色沉淀物，具有一定的稳定性。01血细胞化学染色可显示糖原、脂类、酶、蛋白质等。02

固定固定有物理法与化学法，物理法为干燥和火焰固定，化学法最常用的是甲醛、乙醇、丙酮和醋酸等。01血细胞化学染色流程02

联苯胺法：粒细胞和单核细胞中的过氧化物酶作用于过氧化氢，释放新生态氧，使无色的联苯胺形成蓝色沉淀。02偶氮偶联法：利用人工合成的酶底物，在酶作用下，产生分解产物，再与重氮盐结合引起偶氮偶联，使其形成不溶性的偶氮色素，以此证明酶的存在。01显示

STEP4STEP3STEP2STEP1普鲁士蓝法：细胞内、外铁与酸性亚铁氰化钾作用，形成蓝色亚铁氰化铁沉淀。雪夫反应：过碘酸氧化细胞内糖类中乙二醇基形成乙醛基，醛基与雪夫试剂作用，使无色品红形成红色沉淀。金属沉着法其他尚有物理学方法，如脂溶性染料染色（显示脂质）、荧光显示、放射自显影以及体外活体染色亦常用于临床血液细胞学诊断。

细胞化学定量粗略估量，以染色反应的强弱，受色的深浅，人为地区别为阴性和各种程度的阳性。积分法，是常用的半定量法，将等级估量与百分率相结合它既反映了细胞阳性率的高低，又反映了细胞受色的强弱。百分法，只能反映细胞阳性率，不能反映受色强弱这些方法学在白血病的鉴别诊断上具有重要意义。02下面介绍几种常用的细胞化学染色方法01

四甲基联苯胺法(TMB)【原理】粒细胞和单核细胞的胞浆内的髓过氧化物酶（POXorMPO）分解过氧化氢，释放新生态氧，使无色联苯胺氧化成蓝色联苯胺，后者进一步变成棕色化合物沉着于细胞质内。

【原理】POX四甲基联苯胺TMB（无色）四甲基苯醌二胺(棕色)自我脱氢氧化亚硝基铁氰化钠过氧化氢（基质中）蓝色颗粒（浆内酶部位）粒、单核细胞胞浆联苯胺蓝（蓝色）新生态氧[O]↑

01020304051%TMB亚硝基铁氰化钠饱和溶液1%过氧化氢溶液稀过氧化氢溶液瑞氏染色液【试剂】

【操作】取0.1%TMB乙醇溶液lml，加亚硝基铁氰化钠饱和溶液10μl，混合溶液呈淡棕黄色。在新鲜干燥的血片上，加混合溶液0.5ml,放置lmin后，再加稀过氧化氢溶液0.7ml，染色6min。瑞氏染液复染15～20min。油镜镜检。

【结果】细胞质内有蓝黑色颗粒者为阳性。（－）无颗粒沉着；（±）颗粒细小，分布稀疏；（+）颗粒较粗，局灶分布；（++）颗粒粗大，分布较密，占胞质1/2~2/3；（+++）颗粒粗大，呈团块分布；（++++）全部胞质均部满颗粒，可覆盖胞核。

碱性粒细胞为阴性。嗜酸性粒细胞阳性程度最强，其阳性颗粒比中性粒细胞粗大，有折光。POX主要分布在粒细胞和单核细胞内，随着粒细胞成熟的程度而逐渐增强，中性分叶核粒细胞为强阳性。粒系：【临床意义】

03幼稚单核细胞和成熟单核细胞呈弱阳性反应，颗粒细小，弥散分布。02原始单核细胞为阴性反应，01单核细胞：

淋巴细胞、浆细胞、幼红细胞、组织细胞、巨核细胞均呈阴性反应。其他细胞主要定位于幼稚型巨核细胞的核膜上，可作为原巨核细胞的一种标志物，有助于FABM7的识别。血小板过氧化物酶

01过氧化物酶染色主要用于鉴别急性白血病类型，02急性髓细胞白血病多呈阳性反应，以M3和M2型反应最强，MI和M5型反应较弱，0304故有助于区别M3和M5型。急性淋巴细胞白血病呈POX阴性反应，故为急性髓细胞和淋巴细胞白血病鉴别的重要指标。05

涂片应新鲜制作、厚薄适宜。过氧化氢溶液需新鲜配制，其浓度与加入量不能随意更改。涂片中粒细胞看不见阳性颗粒，红细胞呈棕色或绿色，即表示过氧化氢过浓。若过氧化氢加于血片上不产生气泡，则示无效。TMB配制在85％～88％的乙醇溶液中染色效果较好，勿用90％～95％乙醇，否则细胞表面蛋白质很快凝固，妨碍试剂向胞内渗入而使显色反应减弱或消失。染色液适宜pH值应为5.5，若pH值5.0会出现假阳性结果。试剂应置于低温暗处，防止光线照射失效。染色时加稀过氧化氢溶液之后必须与染色液充分混匀，否则同一片子上细胞染色情况不一致。注意事项

AML-M1

M1-POX(+)

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【原理】苏丹黑B(sudanblackB,SB)是一种能溶解于脂肪中的色素染料，可使细胞内的中性脂肪、磷脂和类固醇着色，即使细胞内微细结构的脂类物质也能显示出来。

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