PCR原理及步骤课件.pptx

PCR原理及步骤课件

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目录

壹

PCR技术概述

贰

PCR反应的组成

叁

PCR反应的步骤

肆

PCR实验设备与材料

伍

PCR实验操作注意事项

陆

PCR技术的优化与改进

PCR技术概述

第一章

定义与原理

PCR技术原理

变性退火延伸循环

PCR技术定义

体外快速扩增DNA技术

01

02

PCR技术的发明

1985年，KaryMullis等发明

发明时间与人物

推动分子生物学发展，获诺贝尔奖

发明意义

PCR技术的应用

医学诊断

用于检测细菌、病毒，诊断遗传疾病、肿瘤。

科学研究

在基因克隆、序列分析、基因突变等领域发挥重要作用。

PCR反应的组成

第二章

DNA模板

基因组DNA、cDNA等

模板来源

提供待扩增的核酸序列

模板作用

引物

短单链DNA片段，与模板链互补配对

引物定义

作为DNA合成起点，指示聚合酶复制

引物作用

DNA聚合酶

催化DNA链合成

关键作用

Taq酶承受高温变性

耐高温特性

PCR反应的步骤

第三章

变性阶段

加热至94-98°C，使DNA双链分离。

高温解链DNA

采用Taq酶等，防止高温失活。

选用耐高温酶

退火阶段

引物与DNA模板互补序列配对

引物结合

退火温度50-65℃，保持30-60秒

温度设置

延伸阶段

在DNA聚合酶作用下，以引物为起点合成互补链。

合成新DNA链

实现DNA复制，扩增目标DNA片段。

延伸目的

PCR实验设备与材料

第四章

PCR仪

温度控制装置

核心部件

加热冷却及检测

功能系统

PCR反应管

常见类型

单管、八联管、板式管

材质特性

医用级聚丙烯，导热佳

PCR反应试剂

用于PCR，无DNase、RNase和蛋白酶活性。

分子生物学级水

灭活RNase酶，降低RNA降解风险。

DEPC处理水

PCR实验操作注意事项

第五章

温度控制

90～95℃，确保DNA完全解链

变性温度

40～60℃，引物与模板结合

退火温度

延伸温度

70～75℃，DNA链合成

反应体系的配制

按说明书准确配制缓冲液、MgCl₂等，确保反应环境适宜。

成分准确配比

在清洁无菌环境下操作，使用专用器材，避免交叉污染。

无菌操作环境

实验结果的分析

分析PCR扩增产物特异性，确保无非特异性条带干扰。

结果准确性

01

阴性对照无扩增，验证实验无污染，结果可靠。

阴性对照意义

02

PCR技术的优化与改进

第六章

热启动PCR

增强特异性，减少非特异性扩增

热启动优势

常温酶无活性，加热后激活

热启动原理

高保真PCR

采用高保真DNA聚合酶，提高PCR扩增的准确性和效率。

高保真酶应用

适用于高GC含量和长片段模板，确保扩增的完整性和特异性。

长片段扩增

实时定量PCR

调整Mg²⁺、引物浓度，缩短退火温度。

优化反应条件

确保特异性和效率，调整浓度比例。

优化引物设计

谢谢

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