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基于ATP与NADH/NAD+比例调控的大肠杆菌琥珀酸合成强化策略探究

一、引言

1.1研究背景

琥珀酸，又名丁二酸，作为一种重要的四碳二羧酸，在食品、医药、化工等众多领域都有着广泛且关键的应用。在食品行业，琥珀酸常被用作调味剂、酸味剂和缓冲剂，用于火腿、香肠、水产品以及调味液等的制作，能够有效提升食品的风味与品质。在医药领域，它可用于生产磺胺药、维生素A、维生素B等，还具备抗痉挛、松痰、利尿和止血等药用功效，对人体器官有着积极影响，能增强人体免疫力、平衡人体内酸碱性程度、安神宁心、活血化瘀。在化工领域，琥珀酸更是一种极为重要的C4平台化合物，可用于合成丁二醇、四氢呋喃、γ-丁内酯、n-甲基吡咯烷酮(NMD)、2-吡咯烷酮等重要化工产品，还是合成可降解生物聚合物如聚丁烯琥珀酸酯（PBS）和聚酰胺的关键原料，这使其在可降解材料的开发与应用中占据着举足轻重的地位。

随着全球对可持续发展和环境保护的关注度日益提高，利用微生物发酵法生产琥珀酸逐渐成为研究热点。微生物发酵法不仅能够利用廉价的可再生资源，实现对石油原料的有效替代，降低生产成本，还具有过程污染小、环境友好的显著优势，并且在发酵过程中可吸收固定温室气体CO?，为缓解温室效应开辟了新途径。在众多用于生产琥珀酸的微生物中，大肠杆菌因其遗传背景清晰、易于操作与调控、培养基要求简单、生长迅速以及能利用多种碳源等诸多优点，成为目前研究最多且应用最为广泛的产琥珀酸菌种之一。

在大肠杆菌生产琥珀酸的代谢过程中，ATP作为细胞内的直接供能物质，为琥珀酸合成相关的酶促反应、物质跨膜运输等过程提供必要的能量支持。而NADH/NAD?作为重要的氧化还原辅酶，参与了众多氧化还原反应，对维持细胞内的氧化还原平衡起着关键作用，进而影响琥珀酸合成途径中相关酶的活性和代谢流的分配。例如，在琥珀酸合成的关键途径三羧酸循环（TCA）中，异柠檬酸脱氢酶反应这一产琥珀酸生成的关键步骤，就需要消耗大量的NADH。当细胞内NADH/NAD?比例失衡时，会对琥珀酸的合成产生负面影响。此外，ATP的合成与消耗也与细胞的生长、代谢以及琥珀酸的合成密切相关。当琥珀酸浓度达到一定水平时，会影响ATP合成的速率，导致ATP/ADP比值降低，从而抑制产琥珀酸的继续合成。因此，深入研究并有效调控ATP和NADH/NAD?的比例，对于优化大肠杆菌生产琥珀酸的代谢过程、提高琥珀酸的产量和生产效率具有至关重要的意义。

1.2研究目的与意义

本研究旨在通过深入探究ATP和NADH/NAD?在大肠杆菌代谢过程中的作用机制，建立起它们与琥珀酸合成之间的内在联系，进而运用基因工程、代谢工程等现代生物技术手段，对大肠杆菌的代谢途径进行精准调控，实现ATP和NADH/NAD?比例的优化，最终达到显著提高大肠杆菌琥珀酸合成量的目标。

在工业生产方面，提高大肠杆菌琥珀酸合成量具有极为重要的现实意义。琥珀酸作为一种关键的平台化合物，在众多工业领域都有着不可或缺的应用，市场对其需求量呈现出持续增长的趋势。然而，目前微生物发酵法生产琥珀酸的产量和效率仍有待进一步提高，这在一定程度上限制了琥珀酸相关产业的发展。通过本研究提高大肠杆菌琥珀酸合成量，能够有效降低琥珀酸的生产成本，提高生产效率，为琥珀酸的大规模工业化生产提供有力的技术支持，从而推动琥珀酸在可降解材料、食品、医药等领域的广泛应用，促进相关产业的发展，为经济增长做出积极贡献。同时，微生物发酵法生产琥珀酸具有环境友好的优势，能够减少对化石原料的依赖，降低生产过程中的环境污染，符合可持续发展的战略要求，对于推动绿色化学工业的发展具有重要的示范作用。

从学术研究角度来看，本研究也具有重要的理论价值。大肠杆菌作为一种模式微生物，其代谢网络复杂且受到多种因素的精细调控。深入研究ATP和NADH/NAD?比例对大肠杆菌琥珀酸合成的影响机制，有助于我们更加全面、深入地理解微生物代谢调控的基本原理和规律，为代谢工程领域的研究提供新的思路和方法。同时，通过对大肠杆菌代谢途径的优化和改造，能够进一步丰富和完善微生物代谢工程的理论体系，为其他微生物细胞工厂的构建和优化提供有益的借鉴，推动微生物代谢工程学科的发展。此外，本研究还将为解决微生物发酵过程中的能量代谢和氧化还原平衡问题提供新的解决方案，对于拓展微生物在生物技术领域的应用具有重要的指导意义。

1.3国内外研究现状

在大肠杆菌产琥珀酸的研究领域，国内外众多科研团队都投入了大量精力，取得了一系列显著成果。国外方面，美国、德国、日本等国家的研究处于前沿水平。美国的研究团队在利用大肠杆菌生产琥珀酸时，通过对代谢途径的深入分析，采用基因敲除技术，成功阻断了与琥珀酸合成竞争的代谢支路，如敲除乙酸激酶和