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紫外分光光度法课件

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目录

壹

紫外分光光度法基础

贰

仪器设备介绍

叁

测量原理与过程

肆

实验操作技巧

伍

常见问题与解决

陆

案例分析与应用

紫外分光光度法基础

章节副标题

壹

定义与原理

紫外分光光度法是一种利用紫外光谱区域的光进行物质定量分析的光谱技术。

紫外分光光度法的定义

摩尔吸光系数是表征物质吸收能力的物理量，与物质的种类和光的波长有关。

摩尔吸光系数的概念

物质吸收特定波长的光后，其内部电子跃迁至高能级，根据比尔-朗伯定律，吸收程度与浓度成正比。

光吸收的基本原理

朗伯-比尔定律是紫外分光光度法定量分析的基础，通过测定吸光度来计算溶液中物质的浓度。

朗伯-比尔定律的应用

01

02

03

04

应用领域

紫外分光光度法广泛应用于化学分析，用于测定溶液中特定物质的浓度。

化学分析

该技术用于检测水体和空气中的污染物，如测定工业排放物中的有害化学物质。

环境监测

在药物研发中，紫外分光光度法用于分析药物的纯度和含量，确保药品质量。

药物研发

食品工业中，紫外光谱用于检测食品添加剂和营养成分，保证食品安全和质量。

食品工业

基本组成

紫外分光光度计使用特定波长的紫外光源，如氢灯或氘灯，以提供稳定的紫外辐射。

光源

01

单色器是分光光度计的核心部件，用于将光源发出的光分解成单色光，以便进行精确测量。

单色器

02

样品池用于盛放待测样品，其材质通常为石英或玻璃，以确保紫外光的透过性。

样品池

03

检测器负责接收通过样品池后的光信号，并将其转换为电信号，用于后续的数据分析和处理。

检测器

04

仪器设备介绍

章节副标题

贰

光源与单色器

紫外分光光度法中常用的光源包括氢灯和氘灯，它们提供稳定的紫外光谱输出。

01

光源的选择与特性

单色器通过棱镜或光栅将复合光分解为单色光，确保检测器接收到的是特定波长的光。

02

单色器的工作原理

定期校准光源和单色器是保证测量精度的关键步骤，常用汞灯进行波长校准。

03

光源与单色器的校准

检测器类型

光电倍增管是紫外分光光度计中常用的检测器，能将光信号转换为电信号，具有高灵敏度和宽动态范围。

光电倍增管检测器

固体检测器如硅光电二极管，因其耐用性和稳定性，在紫外光谱分析中得到广泛应用。

固体检测器

电荷耦合器件（CCD）检测器能够同时检测多个波长的光信号，适用于多组分样品的快速分析。

电荷耦合器件

样品池与附件

01

样品池通常由石英或玻璃制成，以确保紫外光的透射，设计需考虑密封性和耐压性。

02

为了精确测量，样品池附件可能包括温度控制装置，如加热或冷却系统，以维持恒定温度。

03

搅拌装置用于防止样品分层，确保测量时样品均匀，提高数据的准确性和重复性。

样品池的材质和设计

样品池的温度控制附件

样品池的搅拌装置

测量原理与过程

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叁

吸光度与比尔定律

吸光度是溶液对光吸收程度的量度，表示为光通过溶液前后强度的对数比。

吸光度的定义

比尔定律指出吸光度与溶液浓度和光程长度成正比，公式为A=εlc。

比尔定律的数学表达

比尔定律适用于单色光、稀溶液和无光化学反应的条件，确保测量准确性。

比尔定律的应用条件

当溶液浓度过高或存在光化学反应时，实际测量的吸光度可能与比尔定律预测的不符。

偏离比尔定律的情况

校准与标准曲线

使用已知浓度的标准溶液对仪器进行校准，确保测量结果的准确性。

校准过程

通过测定一系列已知浓度的标准溶液的吸光度，绘制出吸光度与浓度之间的关系曲线。

标准曲线的绘制

确定标准曲线的线性范围，以保证在该范围内测量结果的可靠性和重复性。

线性范围的确定

测量步骤详解

将待测样品溶解或稀释至适当浓度，确保样品在紫外光谱范围内透明无沉淀。

样品制备

将样品放入比色皿中，置于仪器光路中，记录在选定波长下的吸光度值。

进行测量

使用标准溶液对紫外分光光度计进行校准，确保测量结果的准确性和重复性。

校准仪器

根据物质的吸收光谱特性，选择最大吸收波长进行测量，以提高检测灵敏度。

选择波长

根据朗伯-比尔定律，将吸光度值转换为样品浓度，并进行必要的数据处理和分析。

数据分析

实验操作技巧

章节副标题

肆

样品准备与处理

在进行紫外分光光度法实验前，准确采集样品是关键，需确保样品具有代表性且无污染。

样品的采集

01

根据样品的浓度，适当稀释以适应仪器的检测范围，保证测量结果的准确性。

样品的稀释

02

对于含有悬浮颗粒的样品，过滤是必要的步骤，以避免对光路的干扰和仪器的损害。

样品的过滤

03

样品在准备后应妥善保存，避免光照、温度变化等外界因素影响其化学性质。

样品的保存

04

实验条件设置

根据待测物质的吸收特性，选择最大吸收波长进行测量，以提高实验的灵敏度和准确性。

选择合适的波长

在测量前，确保仪器的零点校准准确，避免基线漂移影响实