项目六 植物脱毒技术.pptVIP

学习目标掌握植物茎尖脱毒培养的技术原理；了解热处理脱毒的原理；掌握指示植物法进行脱毒苗的鉴定；了解我国的脱毒苗繁育生产体系；掌握脱毒苗的保存和繁殖。任务一植物脱毒的概念与意义一、植物病毒病及其危害1.植物病毒病的定义植物病毒病是指由植物病毒寄生而引起的病；全世界植物病毒近788种，病毒对寄主植物造成毁灭性危害，导致大幅度减产。2.植物病毒病的症状1）变色2）坏死3）畸形4）萎蔫3.植物病毒的侵染特性1）有性生殖退化、仅用无性繁殖方法繁殖的植物，极易受病毒病的侵染。2）大多植物病毒不经种子传播（专化性强的病毒除外）。3）病毒在生长旺盛的部位繁殖速度较慢。4.植物病毒的危害目前病毒病已成为世界作物生产中仅次于真菌病害的主要病害，是造成大田作物和园艺作物等的生活力、产量和品质下降，甚至造成植株大面积死亡的重要原因之一，给农业生产造成巨大的危害和损失。目前病毒危害已严重影响生产的有：大田作物主要包括马铃薯、甘薯、甘蔗和烟草；蔬菜主要包括白菜、大蒜、葱、番茄和萝卜；果树主要包括柑橘、苹果、草莓和香蕉；花卉主要包括香石竹、各种菊花、天竹葵、紫罗兰等；块根、块茎、鳞茎为繁殖器官的作物主要包括大蒜、马铃薯和贝母。二、植物脱毒的概念及意义1.植物脱毒的概念所谓脱毒技术是指采用一定的方法除去植物体内病毒，生产健康繁殖材料的技术。无病毒苗：指不含该种植物的主要危害病毒，即经检测主要病毒在植物体内的存在表现阴性反应的苗木。任务二植物脱毒的原理与方法一、植物脱毒的原理1）植物病毒本身不具有主动转移的能力：在一个植物体内，病毒容易通过维管系统而移动，但在分生组织中不存在维管系统。2）在旺盛分裂的分生细胞中，代谢活性高，竞争抑制了病毒的复制；3）在植物体内，可能存在着病毒钝化系统，它在分生组织中比其他任何区域具有更高的活性。4）在茎尖存在高水平内源生长素，也可能抑制病毒的增殖。二、植物脱毒的方法1.茎尖培养脱毒通过茎尖培养脱毒的原理1）病毒在植物体内的分布：茎尖、根尖顶端分生组织病毒浓度低，甚至不带病毒。（茎尖、根尖无维管束系统，病毒无法运动）2）茎尖大小与脱毒效果：顶端分生组织即生长点（最大直径0.1mm）；也可是带1-3个幼叶原基的茎尖（0.3-0.5mm）最适合作外植体，脱毒效果好。方法1）取样与消毒：取植株顶芽或侧芽梢段消毒方法：剪取顶芽梢段（侧芽）3-5cm。剥去大叶，自来水冲洗干净，用75%酒精浸泡30s左右，再用1-3%NaClO或5-7%漂白粉溶液消毒10-20min，或用0.1%升汞消毒5min，无菌水冲洗4-5次。2）剥取茎尖与接种：在双筒解剖镜下，用解剖刀尖剥去幼叶，露出生长点后，用刀尖切下带1-2个叶原基的生长点（0.3-0.5mm)，再用解剖针将切下的茎尖转接到培养基上，顶部向上，每个试管可接1-2个茎尖。注意事项：防止茎尖失水，用无菌水润湿滤纸。操作时注意随时更换滤纸和接种工具，剥取茎尖时切勿损伤生长点。3）培养：温度（25±2℃）光照（时间10-16h/d，光照度1500-5000lx）湿度（70-80%）2个月左右，大茎尖再生出绿芽，小茎尖（0.1-0.2mm）则需3个月以上，期间应更换培养基，提高BA浓度，可形成大量从生芽。4）生根诱导：将2-3cm的无根苗转入生根培养基（1/2MS+IBA0.1-0.2mg/L）继续培养1-2个月就可形成根。极难生根的（桃、苹果等）通过微体嫁接法获得完整植株。二次茎尖培养，脱毒率达100%培养基与培养方式1）MS培养基适于多种植物茎尖培养，White、Morel培养基也应用广泛。2）培养基中加入（IAA、NAA）、KT或椰乳，适当配合GA可促进茎尖外植体的生长与分化；而应避免使用2,4-D。3）一般通常采用半固体培养基（琼脂培养基）培养。4）茎尖培养最好采用液体培养中的纸桥培养方法，利于外植体的通气、生根，并能消除固体培养基琼脂中杂质对茎尖生长和脱毒效果的不利影响。2.其他组织培养脱毒方法1）愈伤组织培养脱毒将感染病毒的组织离体培养获得愈伤组织，再诱导愈伤组织分化成苗，获得无病毒植株的方法。依据：愈伤组织细胞带病原菌不均一，部分细胞不带病毒；多次继代的愈伤组织中病毒的浓度下降，甚至检测不出病毒。2）珠心胚培养脱毒（柑橘类种子）病毒一般不通过种子传播，故通过珠心胚培养获得的再生植株无病毒。珠心胚培养对柑橘鳞皮病、速衰病、裂皮病、脉突病等十分有效。柑橘珠心胚培养：取花后约7周的幼果胚囊，接种在25