BioRad数字微滴PCR经典课件.pptVIP

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BioRad数字微

滴PCR

一、ddPCR是什么

ddPCR是一种新形的绝对定量PCR,

其特点是灵敏度高、定量精确、检测的线

性范围宽、特异性好、费用适中,是一种

很有前途的分子定量检测手段。

微滴数字PCR的原理,就是把原来一

整管的PCR反应液,分散成几万个,甚至

几百万个极微小的液滴。这些小微滴同时

进行PCR反应,这样就可以计算出原来的

反应液当中,有多少个目标基因的拷贝了。

二、ddPCR的发展

1999已经以数字PCR为名字发表了文章,2011年底数字PCR进入一个商

业化的,一些公司也是这个时候的产生。2012年的一片Nature综述提到

了数字PCR可以为科研临床带来的变化和提供的一些服务。

普通的PCR荧光定量PCRddPCR

1、定量方式是一种绝对的定量方式;

2、对PCR的扩增效率以及他对PCR抑制剂的要求都比第二代的PCR要低;

3、不需要任何的标准品;

4、在实验结果方面,在精确度、灵敏度和重复性一个本质的提升。

三、ddPCR操作流程

四、ddPCR的应用

2、肿瘤的检查(肿瘤的突变序列,肿瘤的拷贝

数突变的检查;

3、二代测序的定量和二代测序的QC;

1)Illumina平台

2)IonTorrent平台

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