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团体标准
T/GDAAV10142025
布鲁氏菌超快速荧光PCR检测技术规范
TechnicalSpecificationforUltra-fastReal-timePCRDetectionofBrucella
2025-09-26发布2025-10-01实施
广东省畜牧兽医学会发布
T/GDAAV1014—2025
I
目次
前言 Ⅱ
1范围 1
2规范性引用文件 1
3术语和定义 1
3.1超快速荧光PCR 1
4缩略语 1
5试剂和耗材 2
5.1试剂 2
5.2引物和探针 2
6仪器设备 2
7样品采集与处理 2
7.1生物安全措施 2
7.1样品采集 2
7.2样品前处理 3
8操作方法 3
8.1DNA提取 3
8.2反应体系的配制 3
8.3超快速荧光PCR反应 4
9质控标准与结果判定 4
9.1阈值设定 4
9.2质控标准 4
9.3结果判定 5
附录A（规范性）溶液配制 6
附录B（资料性）pUC57-virB10重组质粒和内参的制备 7
附录C（规范性）布鲁氏菌和内参引物、探针的名称、序列 9
附录D（资料性）DNA提取方法 10
T/GDAAV1014—2025
Ⅱ
前言
本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由东莞市动物疫病预防控制中心、广东省畜牧兽医学会提出。
本文件由广东省畜牧兽医学会归口。
主要起草单位：东莞市动物疫病预防控制中心、广东省疾病预防控制中心、广东省动物疫病预防控制中心、广州市番禺区动物疫病预防控制中心、超快生物技术（广州）有限公司、海南省动物疫病预防控制中心、广西壮族自治区动物疫病预防控制中心、深圳市动植物疫病预防控制中心、珠海市动物疫病预防控制中心、肇庆市动物疫病预防控制中心、海南省疾病预防控制中心、广州市疾病预防控制中心、广州国家实验室、深圳海关动植物检验检疫技术中心、华润五丰肉类食品（河南）有限公司深圳分公司、东莞市洪梅镇农业技术服务中心、东莞市南城农业技术服务中心。
主要起草人：张险朋、李柏生、徐振娜、胡辛凯、李彩红、管知深、迟庆安、韦正吉、李秋剑、黄铮、周美芳、李丹丹、邹丽容、张欣、孙长云、吴新伟、曹蓝、徐强、韩霄、陈亮、阮周曦、王婉君、林仰孝、李小军、张远龙、卢受昇、黄伟平、曾瀚熙、谭铭光、林梦哲。
T/GDAAV1014—2025
1
布鲁氏菌超快速荧光PCR检测技术规范
1范围
本文件描述了布鲁氏菌超快速荧光PCR检测方法。
本文件适用于细菌培养物、组织样品、动物产品、分泌物、排泄物和环境样品中布鲁氏菌的检测。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过本文件的规范性引用而成为本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB19489实验室生物安全通用要求
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
GB/T18088出入境动物检疫采样
NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1超快速荧光PCRultra-fastReal-timePCR
一种基于快速温控模块技术（升降温速率40℃/s以上），结合快速启动酶及高特异性预混反应体系所构建的高效核酸扩增检测方法，可在8min～15min内完成45个循环反应。
4缩略语
下列缩略语适合本文件。
PCR：聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction）
Ct值：阈值循环数（Cyclethreshold）
DNA：脱氧核糖核酸（DeoxyribonucleicAcid）
F：上游引物（Forwardprimer）
R：下游引物（Reverse
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