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第1页，共28页，星期日，2025年，2月5日选用和设计培养基的原则、方法及制备过程：原则：目的明确、营养协调、经济节约物理化学条件适宜方法：生态模拟、查阅文献精心设计、试验比较步骤：称量、熔化、调PH、过滤、分装、加塞、包扎、灭菌、冷却、无菌检查第2页，共28页，星期日，2025年，2月5日培养基种类：一、按成分的不同分天然培养基、合成培养基、半合成培养基二、按培养基的物理状态分固体培养基、液体培养基、半固体培养基三、按培养基用途基础培养基、选择培养基加富培养基、鉴别培养基第3页，共28页，星期日，2025年，2月5日消毒与灭菌消毒：消灭病原菌和有害微生物的营养体灭菌：杀灭一切微生物的营养体，芽胞和孢子。方法：一、物理的方法：加热、过滤、辐射二、化学的方法：用化学试剂抑制或杀灭微生物。主要破坏细菌代谢机能。如重金属离子，磺胺类药物及抗生素等。第4页，共28页，星期日，2025年，2月5日加热法：干热法：火焰灼烧灭菌和热空气灭菌。1、火焰灼烧适用于接种环、接种针和金属用具如镊子等，试管口和瓶口，涂布用玻璃棒。2、热空气灭菌利用高温干燥空气（160－170C）加热灭菌1－2h，适用于玻璃器皿和培养皿等。原理加热使蛋白质变性，与水的含量有关，当环境和细胞含水量越大，凝固越快。3、注意事项：1）培养基、橡胶制品、塑料制品不能用此法；2）温度控制在180°；3）物品不能太挤；4）温度降至70°时才开箱门。第5页，共28页，星期日，2025年，2月5日湿热法：原理：因为湿热中菌体吸水，蛋白质容易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低；湿热的蒸气有潜热存在。所以效果比同温度下干热好。高压蒸汽灭菌法：1、设备：高压灭菌锅2、时间长短根据灭菌物品的种类和数量不同有所变化。3、适用于培养基、工作服、橡胶物品等的灭菌，也可用于玻璃器皿的灭菌。4、注意事项：1）冷空气彻底排除；2）加水；3）压力降为“0”时方可打开。第6页，共28页，星期日，2025年，2月5日常压蒸汽灭菌：对于不宜用高压蒸汽灭菌的培养基如明胶培养基、牛乳培养基，含糖培养基等可采用此法。彻底灭菌则采用间歇灭菌方法。煮沸灭菌法：适用注射器和解剖器皿，时间10－15min，超高温杀菌135-150°C和2-8s对牛乳和其它液态食品。优点：保持食品价值和营养成分。第7页，共28页，星期日，2025年，2月5日过滤除菌：原理：介质在有压力时阻隔微生物。适用范围：许多材料如血清、抗生素及糖溶液采用此法。设备：蔡氏过滤器，滤膜过滤器。优缺点：不破坏培养基成分，只适用少量滤液。需大量无菌空气以及净化工作台。注意事项：1、压力适当；2、无菌条件下进行；3、防止渗透现象。第8页，共28页，星期日，2025年，2月5日辐射灭菌：原理：紫外线波长在200－300nm，具有杀菌作用，以265-266杀菌力强。此段波长易被细胞中核酸吸收；可产生臭氧和过氧化氢。杀菌效力与强度和时间的乘积成正比。缺点：穿透力不大。距照射物1.2m为宜。应用：无菌室，医院。注意事项：对眼睛和皮肤有刺激作用。射线灭菌：r射线，穿透力强，适用于堆积物品的灭菌。第9页，共28页，星期日，2025年，2月5日化学药品灭菌：原理：应用化学制剂破坏细菌代谢机能。杀菌剂如重金属离子；抑菌剂如磺胺类及多数抗生素。注意：与药品的浓度高低，时间长短，微生物种类以及微生物所处的环境有关。常用化学杀菌剂有：乙醇、醋酸、石碳酸福尔马林、升汞、高锰酸钾、新洁尔灭等第10页，共28页，星期日，2025年，2月5日实验二、微生物的分离、纯化及培养技术分离与纯化：从混杂的微生物群体中获得只含某一种或某一株微生物的过程。为什么要进行纯培养：平板上的单一菌落并不一定保证是一种菌。常用的分离、纯化方法：单细胞挑取法稀释涂布平板法稀释混合平板法平板划线法第11页，共28页，星期日，2025年，2月5日稀释涂布平板法：原理：