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pfm基因：调控铜绿假单胞菌Ⅲ型分泌系统及致病力的关键因子探究

一、引言

1.1研究背景

铜绿假单胞菌（Pseudomonasaeruginosa）作为一种在自然界广泛分布的革兰氏阴性杆菌，在土壤、水、空气以及动植物体表和人体皮肤黏膜等诸多环境中都能生存，其生存的重要条件是潮湿环境。它是一种条件致病菌，也是引发医院感染的主要病原菌之一。由于该菌能产生蓝绿色的水溶性色素，感染伤口时会形成蓝绿色脓液，因此也被称作绿脓杆菌。铜绿假单胞菌感染范围广泛，可累及人体的多个部位和组织，常见于皮肤黏膜受损处，像大面积烧伤、创伤、手术切口等情况，也常出现在长期接受化疗或使用免疫抑制剂治疗的患者身上。其引发的临床疾病种类繁多，涵盖皮肤和皮下组织感染、呼吸道感染、尿路感染、败血症、脑膜炎、中耳炎等。

在医院环境中，铜绿假单胞菌可通过污染医疗器具和带菌医护人员导致医源性感染。据相关研究统计，在美国，它是长期护理医院中常见的医院感染病原体之一；在非洲等地区，其导致的感染死亡率居高不下。对于囊性纤维化（CF）患者而言，由于呼吸道黏液清除功能受损，约24.5%的CF患者会发生铜绿假单胞菌的慢性定植，细菌通过基因适应性变异形成生物膜，与呼吸道炎症相互作用，加剧肺功能恶化。随着抗生素的广泛使用，铜绿假单胞菌的耐药问题日益严重，多重耐药甚至泛耐药菌株不断出现，给临床治疗带来了极大的挑战。

III型分泌系统（T3SS）是铜绿假单胞菌一个至关重要的毒力因子。该系统能够将病原菌的效应蛋白直接注入宿主细胞内，在细菌感染宿主的过程中发挥关键作用，引起人体急性感染。铜绿假单胞菌T3SS基因的表达会受到离子浓度、谷胱甘肽、亚精胺等多种宿主或环境信号的调控，然而在细胞内如何传递外界环境信号从而引起T3SS基因表达变化的机制仍未完全明确。T3SS如同一个精密的“分子注射器”，由多环型基座、针头状突起等多个组件构成，这些组件协同作用，实现将效应蛋白如ExoS、ExoU等注入宿主细胞，进而破坏细胞骨架、抑制免疫应答等，促使细菌在宿主体内的定植、侵袭和扩散。

华培康（Pfizer）费洛蒙（pfm）基因是铜绿假单胞菌生长、生存和致病的关键因素之一，被认为是铜绿假单胞菌T3SS密度依赖型（DD-T3SS）的一个重要调控因子。pfm基因可影响传感器蛋白的产生，而这些传感器蛋白能够调控细菌DD-T3SS的活性。正常表达的pfm具有负调节T3SS的作用，然而大量表达的pfm会使DD-T3SS小型化并增强铜绿假单胞菌的生长和对寄主的侵染性。已有研究表明，pfm基因的增强表达可以导致DD-T3SS过度激活且促进铜绿假单胞菌繁殖，并且pfm基因的过度表达可增加铜绿假单胞菌在人类宿主中侵染的能力。对pfm基因与T3SS之间关系的深入研究，将有助于揭示铜绿假单胞菌的致病机制，为临床治疗和防控提供新的靶点和思路。

1.2研究目的与问题提出

本研究旨在深入探究pfm基因对铜绿假单胞菌III型分泌系统的影响及其潜在的分子机制。具体而言，拟解决以下关键问题：一是pfm基因的表达变化如何直接或间接影响T3SS相关基因的表达水平，包括T3SS的结构基因、调节基因以及效应蛋白基因等；二是pfm基因通过何种信号通路或分子机制来调控T3SS的活性，明确在这一调控过程中涉及的关键信号分子和作用节点；三是pfm基因对T3SS的影响如何进一步作用于铜绿假单胞菌的致病过程，如细菌对宿主细胞的黏附、侵袭能力以及在宿主体内的生存和扩散能力等。通过对这些问题的解答，期望为铜绿假单胞菌感染的防治提供新的理论依据和潜在的治疗策略，例如开发基于pfm基因或其调控通路的新型抗菌药物，或者设计针对T3SS的靶向治疗方法，以应对日益严峻的铜绿假单胞菌耐药和感染难题。

二、铜绿假单胞菌与相关研究基础

2.1铜绿假单胞菌概述

铜绿假单胞菌作为假单胞菌属的代表菌种，是一种革兰氏阴性杆菌，其菌体形态呈球杆状或长丝状，长短不一。在显微镜下观察，可见其菌体一端有单根鞭毛，这一结构赋予了细菌运动能力，使其能够在适宜的环境中移动、寻找营养和侵染宿主。该菌无芽胞，无荚膜，在普通培养基上生长良好，为需氧菌，生长温度范围较广，为25～42℃，其中35℃左右是其最适宜的生长温度，这也与人体的体温相近，为其在人体环境中生存提供了一定条件。

从分布范围来看，铜绿假单胞菌在自然界中广泛存在，土壤、空气、水、动植物体表以及人体皮肤黏膜等处都能发现它的踪迹，潮湿的环境是其生存的重要条件。在人体中，它可寄生于肠道、呼吸道和皮肤等部位，当机体免疫功能受损或皮肤黏膜出现破损时，原本处于共生状态的铜绿假单胞菌就可能转变为致病菌，引发各种感染性疾病。例如在医