T／GXAS 721-2024 鸡传染性支气管炎病毒荧光重组酶介导等温扩增检测方法 （发布稿 ）.pdfVIP

ICS11.220

CCSB41

GXAS

团体标准

T/GXAS721—2024

鸡传染性支气管炎病毒荧光重组酶介导

等温扩增检测方法

Fluorescentrecombinase-aidedamplificationmethodfordetectionof

avianinfectiousbronchitisvirus

2024-05-24发布2024-05-30实施

广西标准化协会发布

前言

本文件参照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。

本文件由广西兽医协会提出、归口并宣贯。

本文件起草单位：广西大学、广西璞缔恩葳生物技术有限公司、广西祝氏农牧有限责任公司、广西

参皇养殖集团有限公司、广西鸿光农牧有限公司、南宁市良凤农牧有限责任公司、广西金陵农牧集团有

限公司、广西富凤农牧集团有限公司、广西园丰牧业集团股份有限公司、广西贵港市港丰农牧有限公司。

本文件主要起草人：磨美兰、张桃妮、唐金文、张愉、陈基明、刘玲、赵文青、韦天超、黄腾、黄

鉴妮、陈秋英、何晓霞、梁星雪、黄湘华、胡艳、黄玉敏、林铁昌、李和鸣、杨福剑、唐雪梅、陈莹、

张宗尧、黄建烨、甘业仙、李非、李羽娜、韦宗海、覃俊江、卢静、蒋维维、黄超、苏保华、黎卓炎、

苏沛州、覃小忠、蒙刚。

鸡传染性支气管炎病毒荧光重组酶介导等温扩增检测方法

1范围

本文件描述了鸡传染性支气管炎病毒（Infectiousbronchitisvirus，IBV）荧光重组酶介导等温

扩增检测方法。

本文件适用于IBV的核酸检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T23197鸡传染性支气管炎诊断技术

NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

3术语和定义

本文件无需要界定的术语和定义。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

IBV：鸡传染性支气管炎病毒（Infectiousbronchitisvirus）

RAA：重组酶介导等温扩增（Recombinase-aidedamplification）

5试剂和材料

5.1引物和探针

引物和探针序列见附录A.1，引物和探针的使用浓度均为10pmol/µL。

5.2检测用试剂盒

RNA抽提试剂盒、反转录试剂盒和荧光型核酸扩增试剂盒（RAA法）宜选取商品化的试剂盒。

5.3阴阳性对照

DNase-FreeWater作为阴性对照，按附录A.2中M基因序列合成的质粒作为阳性对照。

6仪器设备

所需仪器设备如下：

——等温荧光检测仪；

——普通PCR仪；

——天平：称量范围0g～500g，读数精确度0.01g；

——低温离心机；

——迷你涡旋震荡器；

——微量可调移液器（0.5μL～2μL、1μL～10μL、10μL～100μL、100μL～1000μL各1支）

——-20℃冰箱。

7检测步骤

7.1样品采集和处理

宜采集肾脏、气管、肛拭子、咽拭子等样品进行检测，采集与处理按照GB/T23197和NY/T541执

行。

7.2病毒RNA的抽提及cDNA的制备

按照RNA抽提试剂盒要求，抽提待检样品的RNA；