家猪脂肪组织特异性启动子元件克隆及功能验证研究.docxVIP

家猪脂肪组织特异性启动子元件克隆及功能验证研究

一、引言

1.1研究背景

家猪作为重要的家畜，其脂肪组织在猪肉品质和产业中具有举足轻重的地位。脂肪沉积性状是猪最重要的经济性状之一，它直接影响着猪的生产效率、猪肉品质、繁殖性能等诸多方面。猪肉脂肪主要包括皮下脂肪和肌内脂肪，肌内脂肪含量与肉质的鲜嫩度、多汁性和风味密切相关，适量的肌内脂肪能使肉质鲜嫩多汁、风味浓郁，提升消费者的食用体验；而皮下脂肪的厚度则影响着猪的屠宰率和肉品的加工性能。

在基因表达调控的复杂网络中，启动子元件扮演着关键角色。启动子是位于基因起始密码子（ATG）上游的一段DNA序列，如同基因转录的“开关”，能够与RNA聚合酶结合并启动基因的转录过程。它主要包含核心启动区和非核心启动区。核心启动区形成普遍性转录结构，通常由一些短的保守序列（如转录起始位点、TATA-box、CAAT-box等）组成，这些序列的结构特征决定着启动子同RNA聚合酶的识别、结合及起始转录过程。非核心启动区包括近端调控区和远端调控区，往往存在一些特异性的转录因子结合的位点，调控基因转录的时间和空间特异性。根据启动子的转录模式不同，可将其分为组成型、诱导型和组织特异性启动子三类。其中，组织特异性启动子仅在某些特定类型的细胞（组织）或细胞（组织）发育的某一特定阶段高效地转录，其含有决定启动子特异性的顺式调控元件，要与该组织特异性存在的转录因子相结合，才表现出启动子活性，组织特异性启动子驱动的基因往往与该种类型的细胞（组织）功能密切相关。猪脂肪组织特异性启动子对于调控脂肪相关基因在脂肪组织中的特异性表达至关重要，进而影响脂肪的合成、代谢和沉积过程。

1.2研究目的与意义

本研究旨在克隆家猪脂肪组织特异性启动子元件，深入解析其结构与功能。这一研究具有多方面的重要意义。在猪育种领域，获得猪脂肪组织特异性启动子不仅能够推动家猪分子育种的研究，通过精准调控脂肪相关基因的表达，实现对猪脂肪沉积性状的定向改良，培育出肉质更优、生产性能更高的猪品种，满足市场对高品质猪肉的需求，还能用于构建脂类代谢异常的疾病模型猪，推动相关医学、药学的研究，为人类健康和医学发展做出贡献。从基础研究角度来看，有助于深入了解基因在脂肪组织中的表达调控机制，为揭示脂肪代谢的分子生物学过程提供关键线索，丰富和完善脂肪生物学的理论体系。

1.3研究现状

目前，对于家猪脂肪组织特异性启动子元件的克隆研究已取得一定进展。有研究从猪BAC库中分离得到adiponectin基因5’侧翼区序列，并通过5’-RACE确定了3个转录起始位点，构建一系列缺失片段后，发现启动子区-1671-+263是猪adiponectin基因转录活性的有效区，其中-1671—1455是促使adiponectin基因高表达所必需的，且在-1150—1130区存在一个重要的顺式作用元件cAMP-responsiveelement（CRE），与cAMP-responsiveelementbindingprotein（CREB）结合，表明CREB是猪adiponectin基因转录活性的重要调控因子。然而，现有研究仍存在诸多不足与空白。一方面，已鉴定的脂肪组织特异性启动子元件数量有限，难以全面满足对脂肪代谢调控机制深入研究以及猪分子育种实践的需求；另一方面，对于这些启动子元件的转录调控机理尚未完全明晰，其与转录因子以及其他调控元件之间的相互作用网络仍有待进一步深入探索。此外，在不同猪品种间，脂肪组织特异性启动子元件的序列多态性及其对基因表达调控的影响也缺乏系统研究。

二、家猪脂肪组织特异性启动子元件相关理论基础

2.1启动子的结构与分类

2.1.1启动子的基本结构

启动子是位于基因起始密码子（ATG）上游的一段DNA序列，在基因表达调控中起着至关重要的作用，它就像一个“开关”，控制着基因转录的起始。启动子主要包含核心启动区和非核心启动区。核心启动区是形成普遍性转录结构的关键部分，通常由一些短的保守序列组成，这些保守序列对于启动子与RNA聚合酶的识别、结合以及起始转录过程具有决定性作用。转录起始位点是转录开始的位置，它确定了RNA合成的起点；TATA-box是一段富含AT碱基对的保守序列，一般位于转录起始位点上游约25-30bp处，其共有序列为TATA（A/T）A（A/T），能够与转录因子TFIID中的TATA结合蛋白（TBP）特异性结合，从而帮助RNA聚合酶准确地定位到转录起始位点，启动转录过程；CAAT-box的共有序列为GGNCAATCT（其中N为C或T），通常位于转录起始位点上游约75b