病毒学检测技术郭长明14课件.pptxVIP

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;病毒感染的快速诊断主要有形态学检查、病毒蛋白抗原检查和检测病毒核酸三种方法。

电镜和免疫电镜检查、普通光镜。有些病毒能在易感细胞中形成包涵体,用普通光学显微镜检查。能够产生包涵体的畜禽常见病毒有痘病毒、狂犬病病毒、伪狂犬病病毒等。;病毒蛋白抗原检查主要有免疫荧光技术、固相放射免疫测定、酶免疫技术等,在兽医临床上典型的应用是猪瘟荧光抗体染色法检测猪瘟病毒。将组织制成冰冻切片,经冷丙酮固定后,滴加猪瘟荧光抗体37℃作用30min,洗涤,干燥,置荧光显微镜下观察,以鉴定荧光的特异性。;检测病毒核酸主要是针对不同病原微生物具有的特异性核酸序列和结构进行检测。其特点是反应的灵敏度高、特异性强、检出率高。目前利用核酸杂交技术、核酸扩增技术和基因芯片技术等已经研制出多种商品化试剂盒,如口蹄疫病毒系列RT-PCR检测试剂盒。;病料接种动物、禽胚或组织细胞,可进行病毒的分离培养。供接种或培养的病料应作除菌处理。除菌的方法有滤器除菌、高速离心除菌和利用抗生素处理三种。

口蹄疫:水泡皮置平皿内,以灭菌的磷酸盐缓冲液洗涤数次,并用灭菌滤纸吸干、称重,剪碎、研制成1:5悬液,为防止细菌污染,每毫升加青霉素1000IU,链霉素1000μg,置2~4℃冰箱内4~6h,然后用8000~10000r/min速度离心沉淀30min,吸取上清备用。;应根据病毒的不同,选用动物接种、鸡胚接种、细胞培养等方法来进行培养。

病毒的鸡胚培养法主要有四种接种途径,即尿囊腔、绒毛尿囊膜、羊膜腔和卵黄囊。;病毒细胞培养的类型有原代细胞培养、二倍体细胞培养和传代细胞系培养,细胞培养的方法有静置培养、旋转培养、悬浮培养和微载体培养等。;血清学试验最常用的有中和试验、血凝及血凝抑制试验、免疫扩散试验等。

中和试验是病毒型特异性反应,具有高度的特异性和敏感性,常用于口蹄疫、猪水泡病、蓝舌病、鸡传染性喉气管炎、鸭瘟、鸭病毒性肝炎等疫病的检测。;血凝试验和血凝抑制试验为型特异性反应,临床上常用于新城疫和禽流感等疾病的监测。

免疫扩散试验操作简便,特异性与敏感性均较高,常用于马立克氏病、传染???法氏囊病等的诊断。;

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