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博学之,审问之,慎思之,明辨之,笃行之。——《礼记》
金免疫技术轮状病毒实验报告
病毒感染病原学诊断在疾病的预防上可了解流行病学情况,疫苗
的免疫效果以及采取及时的免疫措施及必要的隔离和防护,在病毒感
染的诊断和治疗上可避免不必要的诊断检查,避免滥用抗生素。对某
些病毒疾病可选用有效的抗病毒药物,如用阿糖腺苷或无环鸟苷治疗
单母子疱疹脑炎,丙氧鸟苷治疗严重的巨细胞病毒感染,病毒唑雾化
吸入治疗呼吸道合胞病毒肺炎,齐多夫定、AZT治疗爱滋病等。对一
些病毒感染可进行预后判断,如没有得到及时抗病毒治疗的单纯疱疹
脑炎病人预后极差,肝炎病人长HbeAg阳性者预后不良。
一、常用实验方法
1.病毒分离常用方法:用活细胞、组织、胚胎或动物分离病毒。
细胞培养分离病毒主要过程:细胞培养,病毒分离和病毒鉴定。基本
原理:病毒在活的敏感细胞、组织、胚胎或动物体内复制繁殖。意义:
从病变部位(活检组织、脑脊液、疱疹液、体腔积液)或血液中分离
到病毒的诊断意义很大。从粪便中分离到病毒(如巨细胞病毒,肠道
病毒等)的意义应结合其它病毒学检查结果(如抗病毒抗体等)来判
定。
2.电子显微镜直接检查病毒常用方法:普通电子显微镜检查,
免疫电子显微镜检查。基本原理:标本经负染处理后,根据病毒颗粒
的形态作出判断。意义:能根据病毒颗粒的形态诊断,如轮状病毒、
腺病毒、甲型肝炎病毒、星状病毒等。
3.检测病毒的抗原成分常用方法:对组织或细胞内的病毒成分
其身正,不令而行;其身不正,虽令不从。——《论语》
可用免疫荧光染色、免疫酶染色等;对细胞外的或可溶性的病毒成分
可用方法有:凝集试验、酶联免疫吸附试验(ELISA)、放射免疫、
免疫渗滤层析试验(胶体金)等。基本原理:抗病毒抗体致敏的血球
或吸附抗病毒抗体的载体颗粒与病毒结合;病毒抗原和抗体在凝胶中
相遇形成沉淀线;标记的抗病毒抗体与相应的病毒抗原结合或反应,
通过某种指示系统显示病毒抗原的存在。意义:对大多数病毒而言,
病毒抗原阳性一般可作为诊断急性病毒感染的依据。但对有些病毒
(如巨细胞病毒,受滋病毒,乙肝病毒),病毒抗原阳性常不能说明
宿主的感染状态,如急性、慢性或携带状态。该方法能用于早期快速
诊断病毒感染,特别适用于临床。
4.病毒血清学常用方法:中和试验、补体结合试验、血凝抑制
试验、免疫荧光、免疫酶染色、ELISA、化学发光、时间分辨免疫荧
光、荧光偏振、胶体金。基本原理:抗原和抗体特异性地结合或反应,
通过某种指示系统显示病毒抗体的存在。意义:恢复期血清中抗病毒
抗体滴度≥4倍升高有诊断意义;血清抗病毒IgM抗体阳性可作为
诊断该病毒近期感染的依据。
5.基因诊断(检测病毒遗传物质,如PCR)常用方法:PCR、套
式或巢式PCR、逆转录PCR基本原理:在体外条件下(至少1对DNA
引物,dNTP,缓冲液)DNA聚合酶催化合成与模板DNA互补的新链。
意义:病毒核酸阳性一般可作为诊断病毒感染的依据,但对有些病毒
(如巨细胞病毒,爱滋病毒,乙肝病毒),不能说明宿主感染状态,
如急性、慢性或携带。由于PCR的敏感性非高常,实验条件要求严格,
英雄者,胸怀大志,腹有良策,有包藏宇宙之机,吞吐天地之志者也。——《三国演义》
根据PCR试验结果有时尚不能确定病毒或现疾病的关系,该技术在检
测不同标本,诊断不同病毒性疾病中的意义有待进一步评价。
二、常用实验方法的评价
1.病毒分离优点:是
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