一章动物细胞培养基础知识【共35张】.pptVIP

第十一章动物细胞培养基础知识;优选第十一章动物细胞培养基础知识;一、实验室设置;二、常用器具的清洗消毒方法;二、常用器具的清洗消毒方法;二、常用器具的清洗消毒方法;二、常用器具的清洗消毒方法;三、动物细胞培养用液;（一）、培养基;（一）、培养基;（一）、培养基;（一）、培养基;（一）、培养基;（一）、培养基;（一）、培养基;造成培养基pH波动的主要物质是细胞代谢产生的CO2,在封闭式培养过程中CO2与水结合产生碳酸，培养基pH很快下降。

用过的橡胶制品：同玻璃器材的清洗

促生长效果检测：克隆形成率测定法和连续传代培养测定法。

因此，培养设施不能设在通风场所。

5mol/LHCl15min自来水煮沸蒸馏水煮沸20min

可灭活后分装，使用时4℃融化。

IMDM(Iscove’smodifiedDulbecco’smedium)：适合于细胞密度较低、生长较困难的情况

（3）、无蛋白培养基(proteinfreemedium，PFM)

几种常用的平衡盐溶液：

真菌污染对细胞的影响及污染物的检测

（4）、限定化学成分培养基(CDM)：是指培养基中的所有成分都是明确的，它不含有动物蛋白，也不添加植物水解物，而是使用一些已知结构与功能的小分子化合物，如短肽、植物激素等。

5mol/LHCl15min自来水煮沸蒸馏水煮沸20min

不含动物蛋白的培养基。

培养细胞一旦发生污染多数将无法挽回。

DMEM(Dulbecco’smodifiedEaglemedium);（一）、培养基;（一）、培养基;（一）、培养基;（一）、培养基;（一）、培养基;（一）、培养基;青霉素主要对革兰阳性菌有效，链霉素主要对革兰阴性菌有效。

一般使用的为小牛血清，小牛血清取自出生10～30天的小牛。

血清的质量标准：血清质量的鉴定一般包括

三、培养物的污染及防止

5mol/LHCl15min自来水煮沸蒸馏水煮沸20min

不含动物蛋白的培养基。

三、培养物的污染及防止

不含动物蛋白的培养基。

化学物质（影响细胞生存、非细胞所需的化学成分）

三、培养物的污染及防止

二、常用器具的清洗消毒方法

一般使用的为小牛血清，小牛血清取自出生10～30天的小牛。

污染较严重，细胞增值停止，分裂象消失，细胞质中出现大量堆积物，细胞变圆、脱壁。

生???（真菌、细菌、病毒和支原体）

常用的是青链霉素，俗称“双抗溶液”。;（一）、培养基;（二）、平衡盐溶液;（二）、平衡盐溶液;（三）、其他培养用液;（三）、其他培养用液;（三）、其他培养用液;（三）、其他培养用液;三、培养物的污染及防止;三、培养物的污染及防止;三、培养物的污染及防止;一般配制为100倍浓缩液，配制时应加温至30℃，完全溶解后过滤除菌，分装至小瓶，储存于-20℃。

真菌污染对细胞的影响及污染物的检测

用相差显微镜观察，可见满视野都是点状的细菌颗粒，原来的清晰培养背景变得模糊，大量的细菌甚至可以覆盖细胞，对细胞的生存构成威胁。

5mol/LHCl15min自来水煮沸蒸馏水煮沸20min

添加了植物水解物以替代动物激素、生长因子的作用。

辅助实验室：细胞学实验室+生化分析室

一般使用的为小牛血清，小牛血清取自出生10～30天的小牛。

目前仍然广泛使用的天然培养基是血清（serum），另外组织提取液、促进细胞贴壁的胶原类物质在培养某些特殊细胞时也不可缺少。

无血清培养基：基础培养液+添加组分。

不含动物蛋白的培养基。

天然培养基含有丰富的营养物质，渗透压、pH等也与体内环境相似，但制作过程复杂、批间差异大，因此逐渐为合成培养基所替代。

5mol/LHCl15min自来水煮沸蒸馏水煮沸20min

灭活也会损失一些对细胞有利的成分如生长因子，因此也有人提出血清不经灭活直接用于培养）

理化性质：如渗透压、pH，球蛋白、血红蛋白含量越低血清质量越高。

辅助实验室：细胞学实验室+生化分析室;谢谢大家！