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90天经皮毒性试验方法

90-dayDermalToxicityStudy

1范围

本方法规定了动物90天经皮毒性试验的基本原则、要求和方法。

本方法适用于评价化妆品原料的90天经皮毒性。

2试验目的

通过本试验可获得在一定时期内经皮肤重复暴露可能产生的健康危害的信息，了解其作用靶器官、剂量-反应关系、可逆性以及蓄积的可能性，并估计未观察到有害作用水平（NOAEL）和/或观察到有害作用最低水平（LOAEL），为慢性毒性试验剂量、观察指标、毒性终点的选择及建立人体暴露的安全阈值提供依据。

3定义

3.1未观察到有害作用水平noobservedadverseeffectlevel（NOAEL）

在规定的试验条件下，用现有的技术手段或检测指标未观察到任何与受试物有关的毒性作用的最大剂量。

3.2观察到有害作用最低水平lowestobservedadverseeffectlevel（LOAEL）

在规定的试验条件下，受试物引起实验动物组织形态、功能、生长发育等有害效应的最低剂量。

3.3靶器官targetorgan

实验动物出现由受试物引起的明显毒性作用的器官。

3.4蓄积毒性cumulativetoxicity

机体以低于急性中毒阈值的剂量反复接触受试物，吸收量大于排出量逐渐累积或毒作用累加，引起功能性或器质性损害的能力。

4试验的基本原则

受试物以不同剂量每日经皮给予各组实验动物，至少设立3个剂量组和1个对照组，每组1个剂量水平，连续给予至少90d。通过全面的临床观察、血液学、血液生化、大体解剖和组织病理学检查等，系统性地确定靶器官、剂量-反应关系，并最终确定NOAEL和/或LOAEL，为慢性毒性研究和人类风险评估提供关键安全性依据。

5试验方法

5.1受试物

若受试物为固体，应将其粉碎并用水，或无皮肤刺激性、不影响受试物经皮吸收的溶媒和/或赋形剂充分湿润，以保证受试物与皮肤有良好的接触。若采用介质，应考虑该介质对受试物皮肤通透性的影响。液体受试物一般采用原样，根据剂量设计选用适宜的溶剂稀释后（若需）进行试验。

5.2实验动物和饲养环境

5.2.1动物种系的选择

可采用成年大鼠、兔或豚鼠进行试验，也可使用其他种属的动物，但需说明理由。建议试验开始时实验动物的体重范围为：大鼠200~300g（不超过9周龄）；兔2.0~3.0kg；豚鼠350~450g。试验开始时同性别体重差异应在平均体重的±20%之内。当该试验作为慢性试验的预备试验时，则在两项试验中所使用的动物品系应当相同。

5.2.2动物的性别和数量

主试验组每一剂量组实验动物数，啮齿类一般不少于10只/性别，非啮齿类一般不少于5只/性别，皮肤健康完整。雌性应为未妊娠和未经产的动物。应至少在对照组和最高剂量组增加动物作为恢复期卫星组，若计划在试验过程中处死动物则每个组别增加动物，啮齿类一般不少于5只/性别，非啮齿类一般不少于2只/性别。

5.2.3动物饲养

实验动物及动物试验环境、饲料、饮水均应符合国家相应规定。试验期间，动物自由饮水和摄食。给予受试物期间，建议动物单笼饲养。

5.3剂量设计

试验剂量的设计可参考急性经皮毒性LD50剂量、预试验剂量或相关结构化合物经皮毒性剂量进行。试验时至少要设3个剂量组和1个对照组。如果需要，还应设置溶媒和/或赋形剂对照组。本方法采用等面积给予受试物的方式，即动物在相同体表面积的皮肤区域（如背部脱毛区）给予受试物，应记录受试物浓度（mg/mL或%）和单位面积涂敷量（mg/cm2）。在暴露部位面积不变的情况下，应通过改变受试物浓度进行剂量调整，而不应通过增加厚度或体积来达到增加受试物剂量的目的。除不接触受试物外，对照组的其他条件均与试验组相同。最高剂量的设计应在引起毒效应的前提下又不致造成动物死亡或严重反应。低剂量应不出现任何毒性作用。若掌握人群接触水平，则最低剂量应高于人群的实际接触水平。中间剂量可引起较轻的可观察到的毒性作用。若设多个中间剂量组，则各组的剂量应引起不同程度毒性作用。各剂量的组间距以2~4倍为宜，一般不超过10倍。

若受试物引起严重的皮肤刺激效应，则应降低受试物的使用浓度，尽管这样可导致原来在高剂量下出现的其他毒性作用减弱或消失。若在试验早期动物的皮肤受到严重损伤，则有必要终止试验，并使用较低的浓度重新开始试验。

5.4限值试验

本项试验中，如果剂量超过1000mg/kgBW/d的限值时仍未产生可观测到的毒性效应，且可依据结构相似化合物已有信息预期受试物毒性时，可考虑不必进行3个剂量水平的试验。除非预期的人体暴露量表明需要更高剂量，否则应采用限值试验。

5.5受试物给予