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志不强者智不达，言不信者行不果。——墨翟
1.概述
在自然条件下,很多质粒都可通过细菌接合作用转移到新的宿主内,但在人工构建的质粒载
体中,一般缺乏此种转移所必需的mob基因,因此不能自行完成从一个细胞到另一个细胞的
接合转移。如需将质粒载体转移进受体细菌，需诱导受体细菌产生一种短暂的感受态以摄取
外源DNA。
转化(Transformation)是将外源DNA分子引入受体细胞,使之获得新的遗传性状的一种手段,
它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究领域的基本实验技术。转化过程所用的受体细
胞一般是限制修饰系统缺陷的变异株，即不含限制性内切酶和甲基化酶的突变体(Rˉ,Mˉ),它
可以容忍外源DNA分子进入体内并稳定地遗传给后代。受体细胞经过一些特殊方法(如电
击法,CaCl2,RbCl(KCl)等化学试剂法)的处理后,细胞膜的通透性发生了暂时性的改变,成为
能允许外源DNA分子进入的感受态细胞(Compenentcells)。进入受体细胞的DNA分子
通过复制,表达实现遗传信息的转移,使受体细胞出现新的遗传性状。将经过转化后的细胞在
筛选培养基中培养，即可筛选出转化子(Transformant,即带有异源DNA分子的受体细胞)。
目前常用的感受态细胞制备方法有CaCl2和RbCl(KCl)法，RbCl(KCl)法制备的感受态细胞
转化效率较高,但CaCl法简便易行,且其转化效率完全可以满足一般实验的要求,制备出的
2
感受态细胞暂时不用时,可加入占总体积15％的无菌甘油于-70℃保存(半年),因此CaCl2法
为使用更广泛。
为了提高转化效率,实验中要考虑以下几个重要因素：
1.细胞生长状态和密度:不要用经过多次转接或储于４℃的培养菌，最好从－70℃或-20℃
甘油保存的菌种中直接转接用于制备感受态细胞的菌液。细胞生长密度以刚进入对数生长期
时为好，可通过监测培养液的OD来控制。DH5α菌株的OD为0.5时,细胞密度在5
600600
7
×10个/ml左右(不同的菌株情况有所不同),这时比较合适。密度过高或不足均会影响转化
学习文档仅供参考
其身正，不令而行；其身不正，虽令不从。——《论语》
效率。
2.质粒的质量和浓度:用于转化的质粒DNA应主要是超螺旋态DNA(cccDNA)。转化效率
与外源DNA的浓度在一定范围内成正比,但当加入的外源DNA的量过多或体积过大时,转
化效率就会降低。1ng的cccDNA即可使50μl的感受态细胞到达饱和。一般情况下,DNA
溶液的体积不应超过感受态细胞体积的5％。
3.试剂的质量:所用的试剂,如CaCl2等均需是最高纯度的(GR.或AR.),并用超纯水配制,
最好分装保存于干燥的冷暗处。
4.防止杂菌和杂DNA的污染：整个操作过程均应在无菌条件下进行,所用器皿,如离心管,
tip头等最好是新的,并经高压灭菌处理,所有的试剂都要灭菌,且注意防止被其它试剂、DNA
酶或杂DNA所污染,否则均会影响转化效率或杂DNA的转入,为以后的筛选、鉴定带来
不必要的麻烦。本实验以E.coliDH5a菌株为受体细胞,并用CaCl处理,使其处于感受态,
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