富硒补充剂的生物有效率以及生物利用度.pptVIP

富硒补充剂的生物有效率以及生物利用度演示文稿第1页，共28页。

富硒补充剂的生物有效率以及生物利用度第2页，共28页。

前言硒是一种化学元素，1957年以前,微量元素硒是作为毒物进行研究的,1957年硒首次被证实为动物及人体必需的微量元素后,国内外许多学者已对其进行了广泛的研究，如1973年Rotruck和Flohe等人证实硒是谷胱甘肽的组成部分。随着研究的深入，各国进而制定了有关硒的RDA，如英国60-75ug/d【2】，然而根据世界卫生组织WHO)和国际粮农组织(FAO)的标准,全球严重缺硒人群(日摄入量7~11μg)达5亿~10亿以上,缺硒人群远远多于硒过量的人群【1】.2025/10/22第3页，共28页。

研究背景食物中的硒浓度取决于土壤中硒的浓度，进而通过食物链影响人体中硒的浓度，因此，人群硒状态呈地理分布。1984年芬兰实施作物施肥强化硒政策后，到2001年，居民硒的摄入量由之前的38ug/d上升到80ug/d,表明了强化硒的有效性。然而，对于比利时这个国家而言，人们更依赖于富硒的膳食补充剂来改善他们的硒状态。本研究作者将比利时市场上的富硒补充剂归为三大类，通过体外消化模型比较研究三种不同类别的硒补充剂的生物有效性以及生物利用度。第4页，共28页。

主要实验材料Se-enrichedyeast（167ug/gse)；多维多矿sodiumselenate(30ug/g)；多维多矿sodiumselenite(35ug/g)；pepsinI;bilesalt;Tris;pancreatin;ICP-MS;HPLC;Caco-2cell；DMEM;FBS,six-wellplate;HBSS;PEtrancewell。第5页，共28页。

主要材料ICP-MS:是电感耦合等离子体质谱仪，主要用途是进行化学元素分析检测，特别是对金属元素分析,检出限比较低。caco-2细胞，人克隆结肠腺癌细胞，结构和功能类似分化的小肠上皮细胞，可用来模拟体内转运的实验.第6页，共28页。

transewell技术这是一类有通透性的杯状的装置，根据Corning公司的Transwell说明书中的介绍，可以认为这是一种膜滤器（Membranefilters），也可认为是一种有通透性的支架（permeablesupports）。将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以PET膜相隔。第7页，共28页。

将细胞种在上室内，上室与下室加入同样的培养基培养细胞直至分化后，上室再加入需要研究的物质的溶液，通过caco-2单层细胞以及滤膜器，进而可以研究该物质的转运吸收。嵌套的多孔底部使研究者可以从上层或下层接触到细胞，从而为体外的细胞运输和其他代谢活性研究提供通用的工具。第8页，共28页。

技术路线第9页，共28页。

公式第10页，共28页。

方法：硒的分析50%硝酸微波消化后进入ICP-MS系统测得原始硒的浓度。酶法提取后进入ICP-MS系统可得到总硒浓度酶法提取后，进入反相HPLC与ICP-MS联用系统测得原始不同形式硒的浓度（0–5min100%HFBA,5–10min70%HFBA-30%methanol）酶法提取：第11页，共28页。

方法：胃以及肠内消化胃内消化：用100ml锥形瓶称量样品，用40mlHBSS稀释(PH=2)，加入2ml胃蛋白酶，充入氮气在无氧状态下37°C,350rpm水浴振摇2h。肠内消化：用NaHCO3调整上述得到的消化液的PH到5.3然后加入胆汁以及胰酶，充入氮气37°C,350rpm水浴振摇2h，消化结束后80°C,10min灭活酶类，然后3000rpm离心15min,取上清液进行分析。第12页，共28页。

方法：细胞培养以及处理caco-2细胞复苏后，在DMEM培养基培养，并加入10%热灭活FBS以及1%非必须氨基酸，以及200mm谷胱甘肽后，37摄氏度5%二氧化碳孵箱里培养,传代后以细胞密度约为4×105接种于有渗透性的PETtranswell细胞培养室里，trasewell放置于六孔板里，上室和下室分别加入1.5和2.5ml培养液培养直至细胞完全分化（21天），再将从消化过程得到的可溶性硒溶液加入上室里（下室加入1%的白蛋白），3小时后收集下室液体以及细胞，作进一步的检测分析。第13页，共28页。

结果1.样品中硒的分析检测结果N=3，n=3第14页，共28页。

富硒酵母硒酸钠亚硒酸钠硒标准曲线第15页，共28页。

结果表2表明：1硝酸消化后100%还原了提供的样品里面的硒，并且确认了供应商的提供样品的信息。2经酶法提取后，富硒酵母里的