实验一特殊显微镜及其使用.pptVIP

实验内容;实验要求;实验一特殊显微镜及流式细胞仪的使用;1、口腔上皮细胞

2、活细胞（细胞系）

3、培养的紫菜或小新月菱形藻

4、流式细胞仪的演示;现在是5页\一共有48页\编辑于星期六;暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜;实验目的：掌握暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜及流式细胞仪的原理、构造及其使用方法。

学习特殊显微镜操作的目的：

暗视野显微镜：看到运动的物体，利用目标物体的轮廓与背景区分开

荧光显微镜：辨别含有荧光物质所在的位置;一、暗视野显微镜;1.原理

利用暗视野聚光器（或挡板）使入射光束的中央光束被阻挡．不能由下而上地通过标本进入物镜，只能倾斜地照射在观察的标本上。标本遇光发生反射或散射，物镜接触不到入射光源的光线，只能接触标本的反射和散射光。因而整个视野的背景是黑的，物体的边缘是亮的，使在黑暗的背景上呈现出明亮的像。;2.操作方法（P14）;注意事项;用途：;3.实验内容、材料与仪器;二、相差显微镜;相差：同一光线经过折射率不同的介质其相位发生变化并产生的差异。;相差显微镜与普通显微镜的主要不同之处是：

1）用环状光阑代替可变光阑

2）用相差物镜(通常标有PH的标记)代替普通物镜；

3）带有一个合轴调中望远镜CT:

用于环状光阑的环孔与相差物镜相板共轭面的环孔（暗环）在光路中准确合轴，使成像的相位差变为振幅差；

4）有绿色滤色片：用于消色，可吸收红色和蓝色光，只透过绿光，使波长范围小的单色光线进行照明，并有吸热作用，能使相差观察获得良好的效果;1.灯箱

2.滤色片座

3.相衬环杆

4.相衬环调节螺钉

5.目镜

6.三目头

7.手轮松紧张力圈

8.粗动调焦手轮

9.电源插头

10.电源插座

11.微动调焦手轮

12.物镜

13.载物台

14.聚光镜调节螺钉

15.聚光镜托架

16.孔径光栏调节转环

17.灯座调节螺钉;18.视场光栏调节手柄

19.聚光镜固紧螺钉?

20.聚光镜升降手轮?

21.移动工作台????

22.纵向移动手轮

23.横向移动手轮

24.电源开关

25.亮度调节旋钮

26.移动机构固紧螺钉

27.升降限位固紧手柄

28.镜筒固紧螺钉

29.观察摄像拉杆

30.集光镜调节手柄

31.聚光镜刻度处;3使用方法：

;4用途：

用于观察组织培养中活细胞形态结构或未染色标本。

5、标本

活细胞

;荧光显微镜是利用一个高发光效率的点光源，经过滤色系统发出一定波长的光(如紫外光3650入或紫蓝光4200入)作为激发光，激发标本内的荧光物质发射出各种不同颜色的可见荧光，再通过物镜和目镜的成像、放大，以供检视和拍摄。;当一个物体吸收了紫外光或者短波光的能量，它能发射出比原来吸收的波长更长的光。这种波长长于激发光的可见光称为“荧光”。;自发荧光（不加染色）：有些物质不加染色，也能发出荧光（自发荧光或原发荧光），但在医学和生物学领域中，只有很少物质具有自发荧光。

二次荧光（用化学染色）：非荧光性的物质（蛋白质、碳水化合物）用荧光色素染色，由荧光色素产生荧光（二次荧光），以便进行观察。对特定物体选择合适的荧光色素，该物体就能和周围的组织或细胞区别出来而可以观察到。

抗体荧光技术（用免疫染色）：利用特定的抗原必然和特定的抗体相结合这一个事实，有意识地使带荧光标记的抗体和标本中的抗原进行抗原/抗体反应，这样两者的结合体就能通过抗体的荧光观察到。;现在是24页\一共有48页\编辑于星期六;普通光学显微镜加附件：

1)荧光光源

2)激发滤片

3)双色束分离器

4)阻断滤片等

的基础上组成的。;荧光显微镜内部构造（反射式）;;激发滤色镜(exciterfilter);阻断滤光镜(barrierfilter)：;2.4、荧光显微镜的光路;透射荧光显微镜光路图;反射荧光显微镜光路图;;缺点：;3.2.反射荧光显微镜：;优点：;1）打开灯源开关（汞灯及普通灯光源），超高压汞灯要预热几分钟才能达到最亮点。

2）反射式荧光显微镜需在光路的插槽中插入所要求的激发滤片／双色束分离器／阻断滤片的插块。

3）放置标本片，调焦后即可观察。使用中应注意：末装滤光片不要用眼直接观察，以免引起眼的损伤；

4）高压汞灯关闭后不能立即重新打开，需经5分钟后才能再启动，否则会不稳定，影响汞灯寿命。

5）先在普通光源下（数字调为1）用10倍物镜调整好玻片的焦距，后转至40倍物镜。材料目标与焦距调好后，关闭普通光源的电源（或用载物台下面的挡板将来自下面的普通光源挡住），数字调至2-4，其中2为红色