第五章植物人工繁殖.pptVIP

植物组织培养技术---培养基技术培养基的组成无机盐有机物调节物质其他物质糖类氨基酸维生素醇类植物激素生长素细胞分裂素赤霉素第30页，共81页。1、无机盐培养基中无机盐的浓度通常在25mmol/L左右。根据添加量多少分为大量元素(浓度大于0.5mmol/L)和微量元素(浓度低于0.5mmol/L)。大量元素主要有氮、硫、磷、钾、钙、镁。微量元素主要包括铁、锰、铜、锌、氯、硼、钼等。微量元素对于蛋白或酶的生物活性十分重要并参与生物过程的调节分重要，并参与生物过程的调节。第31页，共81页。2、有机物（1）糖类糖是离体培养的植物细胞所必需的，既可以作为碳源，又可以维持渗透压。最常用的碳源是蔗糖，葡萄糖和果糖也是较好的碳源。麦芽糖、半乳糖、甘露糖和乳糖在组织培养中也有应用。（2）氨基酸氨基酸是很好的有机氮源，可直接被细胞吸收利用。培养基中最常用的氨基酸是甘氨酸，其他的如精氨酸、谷氨酸，谷酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等也常用。通常采用蛋白质水解产物（包括酪蛋白水解物）、谷氨酰胺或氨基酸混合物。第32页，共81页。（3）维生素维生素以各种辅酶的形式参与多种代谢活动，对生长、分化等有促进作用。大多数的植物细胞在培养中都能合成所必需的维生素，但在数量上不足，通常需加入一至数种维生素。常用的维生素包括盐酸硫胺素（VB1）、盐酸吡哆醇（VB6）、抗坏血酸（Vc）、烟酸（Vpp）、生物素（Vh）、泛酸钙、叶酸等。VB1对愈伤组织的产生和生活力有重要作用；VB6能促进根的生长；Vc有防止组织变褐的作用。（4）肌醇肌醇对糖类的相互转化有促进作用。肌醇能促进愈伤组织的生长以及胚状体和芽的形成，对组织和细胞的繁殖、分化有促进作用，对细胞壁的形成也有作用。腺嘌呤是合成细胞分裂素的前体物质之一。添加腺嘌呤能促进细胞合成分裂素，有利于细胞的分裂和分化，促进芽的形成。第33页，共81页。3、调节物质（1）植物激素植物激素是植物自然状态下产生的、对生长发育有显著作用的微量有机物。植物激素能影响植物的生长和分化。在个体发育中，不论是种子发芽、营养生长、繁殖器官形成以至整个器官成熟过程都主要由激素控制。植物体内的激素与细胞内某种称为激素受体的蛋白质结合后，影响DNA、RNA和蛋白质的合成，并对特殊酶的合成起调控作用，从而表现出调节代对特殊酶的合成起调控作用从而表现出调节代谢的功能。第34页，共81页。（2）生长素生长素是由色氨酸通过一系列中间产物形成的。在植物组织培养中，生长素主要用来刺激细胞分裂和诱导根的分化。常用的生长素有吲哚乙酸（IAA）、2，4-二氯苯氧乙酸（2，4-D）、萘乙酸（NAA）、吲哚丁酸（IBA）等。IAA能促进生长区细胞的分裂和非生长区细胞的伸长，诱导根系的发生，促进雌花的分化及果实的形成。NAA和IBA广泛用于生根，并与细胞分裂素互作促进芽的增殖和生长。2，4-D起动能力比IAA高10倍，特别在促进愈伤组织的形成上活力最高，但它强烈抑制芽的形成。第35页，共81页。（3）细胞分裂素细胞分裂素大多是嘌呤族衍生物。自然状态下分裂素主要在根中形成，茎端、萌发中的种子、发育中的果实和种子也能合成分裂素。分裂素的生理作用主要是诱导芽的分化促进侧芽萌发生长、促进细胞分裂与扩大。分裂素多用于诱导不定芽的分化和茎、苗的增殖，而在生根培养时使用较少或用量较低。分裂素主要有6-呋喃氨基嘌呤（激动素KT）、6-苄基腺嘌呤（6-BA）和玉米素（ZT）等。其中最常用的是6-苄基腺嘌呤。ZT活性最强，但昂贵。激素配比生长素/细胞分裂素高适中低有利于根的形成和愈伤组织的形成有利于根芽的分化有利于芽的形成第36页，共81页。培养基分类1、富盐平衡培养基目前使用最广泛的一类，代表性的培养基有MS、LS、BL、BM、ER等。特点：无机盐浓度高，微量元素种类齐全，浓度高；元素间比例适当，离子平衡性好，具有较强的缓冲能力、稳定性好、营养丰富，一般培养时无需再加入有机成分。2、高硝态氮培养基代表性培养基有B5、N6、SH。特点是：硝酸钾浓度高，氨态氮浓度低，含有较高浓度的硫胺素（VB1）。第37页，共81页。3、中盐培养基代表性培养基有Nitsch、Miller、Blaydes、H。大多是在MS培养基基础上进行改良设计。特点是：大量元素无机盐为MS的一半，微量元素种类减少、含量增高。维生素种类比MS增多，例如增加了生物素、叶酸等。4、低盐培养基代表性培养基有White、WS、HE、HB。特点是：无机盐有机成分含量浓度低多用作生根培养的培养基无机盐、有机成分含量浓度低，多用作生根培养的培养基。第38页，共8