沙门氏菌的检测2讲课文档.pptVIP

选择性琼脂亚属Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ亚属Ⅲ（亚利桑那菌）BS菌落为黑色有金属光泽、棕褐色或灰色，菌落周围培养基可呈黑色或棕色；有些菌株形成灰绿色的菌落，周围培养基不变黑色有金属光泽HE蓝绿色或蓝色，多数菌落中心黑色或几乎全黑色；有些菌株为黄色，中心黑色或几乎全黑色。乳糖阳性的菌株为黄色、中心黑色或几乎全黑色，乳糖迟缓阳性或阴性的菌株为蓝绿色或蓝色，中心黑色或几乎全黑色SS无色半透明，产硫化氢菌株有的菌落中心带黑色，但不明显。乳糖迟缓阳性或阴性的菌株，与亚属Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ相同；乳糖阳性的菌株为粉红色，中心黑色，但中心无黑色形成时与大肠埃希氏不能区别第27页，共43页。SS琼脂平板第28页，共43页。第29页，共43页。BS琼脂第30页，共43页。BS上的菌落DHL上的菌落SS上的菌落第31页，共43页。沙门氏菌的检测第1页，共43页。沙门氏菌的检测第2页，共43页。一、实验目的1.掌握沙门氏菌属的检测方法2.了解沙门氏菌的基本生化反应及原理第3页，共43页。二、实验器材1.菌种：沙门氏菌、大肠杆菌2.检样：鲜鸡蛋3.培养基：四硫磺酸钠黄绿（TTB）增菌液；氯化镁孔雀绿增菌液（MM)；亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液；亚硫酸铋（BS）琼脂；HE琼脂；SS琼脂；三塘铁琼脂（TSI）4.设备：冰箱、恒温培养箱、均质器、振荡器、电子天平、无菌锥形瓶、无菌吸管、无菌培养皿、无菌试管、无菌毛细管第4页，共43页。1.四硫磺酸钠黄绿（TTB）增菌液基础液900mL硫代硫酸钠溶液100mL碘溶液20.0mL煌绿水溶液2.0mL牛胆盐溶液50.0mL临用前，按上列顺序，以无菌操作依次加入基础液中，每加入一种成分，均应摇匀后再加入另一种成分。第5页，共43页。蛋白胨10.0g蒸馏水1000mLpH7.0±0.2牛肉膏5.0g氯化钠3.0g碳酸钙45.0g（碳酸钙可以调节ph,是培养基在养菌过程中维持一定ph,否则ph过低,影响菌株生长另外还有筛选产酸菌的作用）除碳酸钙外，将各成分加入蒸馏水中，煮沸溶解，再加入碳酸钙，调节pH，高压灭菌121℃，20min基础液第6页，共43页。硫代硫酸钠溶液硫代硫酸钠（含5个结晶水）50.0g蒸馏水加至100mL高压灭菌121℃，20min。（硫代硫酸钠作为中和剂，可以灭菌121,15min，没有影响的，检验含有次氯酸钠的消毒水微生物，需要加入1.5%硫代硫酸钠溶液；培养基中硫代硫酸钠和磺所生成的四硫磺酸，能抑制大部分大肠埃希氏菌的生长，而伤寒与副伤寒沙门氏菌仍能生长，因为沙门氏菌具有四硫磺酶，能分解四硫磺酶。）第7页，共43页。ＴＴＢ培养基使用方法和注意事项1.使用方法：称取本品93.55g，溶解于1050ml蒸馏水中，加热溶解，临用前加入20％碘液20ml,0.5g煌绿2ml。2.注意事项：ＴＴＢ培养基不加碘液可在4-10度冰箱保存。加入碘液后必须在几小时内使用。培养基中有白色碳酸钙沉淀为正常现象。第8页，共43页。3.原理：四硫酸钠是由硫代硫酸钠和碘经氧化生成而来，它对大肠菌群有抑制作用，对沙门氏菌无影响。因沙门氏菌具有四硫磺酸酶，能分解四硫磺酸钠，而大肠菌群没有这种酶，故生长受抑制。碳酸钙为缓冲剂，可使沙门氏菌不致因酸碱度改变而死亡。第9页，共43页。2.氯化镁孔雀绿增菌液（MM)甲液：胰蛋白胨5g；磷酸二氢钾1.6g；氯化钠8g蒸馏水1000ml；2.乙液：氯化镁40g；蒸馏水100ml3.丙液：0.4%孔雀绿水溶液4.制法:上述成分配好后，121度高压灭菌15min，临用时取甲液90ml；乙液9ml丙液0.9ml第10页，共43页。MM增菌液各成分的作用胰蛋白胨提供氮源和碳源满足细菌生长的需求；氯化钠可维持均衡的渗透压；磷酸二氢钾是缓冲剂；氯化镁可以增加培养基的渗透压；孔雀绿抑制非沙门氏菌的生长，较低的pH结合氯化镁和孔雀绿使培养基具有较高的选择性。第11页，共43页。3.亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液成分蛋白胨5.0g乳糖4.0g磷酸氢二钠10.0g亚硒酸氢钠4.0gL-胱氨酸0.01g蒸馏水1000mLpH7.0±0.2制法除亚硒酸氢钠和L-胱氨酸外，将各成分加入蒸馏水中，煮沸溶解，冷至55℃以下，以无菌操作加入亚硒酸氢钠和1g/LL-胱氨酸溶液10mL（称取0.1gL-胱氨酸，加1mol/L氢氧化钠溶液