纳米制剂通过增强血肿清除并抑制神经炎症用于脑出血的治疗研究.pdfVIP

摘要

出血性脑卒中（Intracerebralhemorrhage,ICH），又称脑出血，是由非外伤性的脑

实质内的血管破裂引起的，是一种严重的脑卒中亚型。脑出血病死率高达80%，存

活的患者伴随严重的后遗症，对人类社会造成严重影响。目前，针对脑出血仍没有有

效的药物，临床上一般采取开颅手术进行治疗。然而，开颅手术患者依从性低，造成

感觉或视野障碍，也会引起神经功能障碍等后遗症。研究表明，脑出血后产生的血肿

及进一步的小胶质细胞激活所导致的炎症反应是脑出血的两个主要原因。脑出血后，

大量血液渗入脑组织，红细胞（Redbloodcells,RBCs）作为血液中主要成分进入脑

组织后损伤大量神经细胞，并进一步引起小胶质细胞的激活，导致炎症风暴。因此，

有效清除血肿并调控小胶质细胞炎性表达是治疗脑出血的关键。

基于此，本课题构建了一种能够有效清除血肿并调控小胶质细胞表型的DNA纳

米制剂（SDz）。该纳米制剂由特异性识别小胶质细胞内信号调节蛋白α（Signal

regulatoryα,SIPRα）的DNA酶通过滚环扩增（Rollingcircleamplification,RCA）自

组装形成。SDz在小胶质细胞的酸性内切/溶酶体微环境下发生结构崩塌，释放出镁

离子和SIRPαDNA酶。其中，镁离子作为辅因子，激活SIRPαDNA酶的切割活性，

通过阻断CD47-SIRPα信号通路，增强小胶质细胞对红细胞的吞噬，从而促进血肿

清除。同时，镁离子通过抑制Toll/NF-κB/MAPK信号通路，将小胶质细胞调控为M2

表型，进而调节炎症微环境。此外，我们意外发现SIRPαDNA酶具有血红蛋白

（Hemoglobin,Hb）捕获能力，能够精准靶向至脑出血部位。综上，该纳米制剂通过

捕获Hb靶向脑出血部位，SIRPαDNA酶和镁离子的协同作用实现对脑出血的高效

治疗。具体研究内容如下：

1、SDz的制备和表征

依据SIPRαmRNA碱基，设计特异性识别小胶质细胞内SIPRα的DNA酶序

列的磷酸化模板链，通过RCA制备DNA纳米制剂（SDz）。通过琼脂糖凝胶电泳

（Agarosegelelectrophoresis）验证SDz成功制备。同时，通过扫描电子显微镜

（Scanningelectronmicroscopy,SEM）和透射电子显微镜（Transmissionelectron

microscopy,TEM）研究SDz的形态，观察到SDz形态均一，呈球形结构，表面含有

层叠花瓣状褶皱。动态光散射（Dynamiclightscattering,DLS）结果显示，SDz分布

均一，粒径约为425nm，与SEM和TEM结果一致，Zeta电位约为-13.4mV。通过

能谱仪（Energydispersivespectrometer,EDS）分析SDz的元素组成，进一步表明SDz

的成功制备。采用电感耦合等离子体质谱（Inductivelycoupledplasmamass

spectrometry,ICP-MS）等手段验证SDz在酸性环境下结构崩塌。另外，制备无识别

I

河北科技大学硕士学位论文

剪切功能的核酸纳米制剂（cDz）作为对照，通过荧光共振能量转移（Fluorescence-

resonanceenergytransfer,FRET）和聚丙烯酰胺凝胶电泳（Polyacrylamidegel

electrophoresis,PAGE