基因工程重组构建与筛选优品文档.pptVIP

基因工程重组构建与筛选;;二、平末端DNA片段的连接;（二）同聚物加尾法;（3）所用动力系统：火药爆炸力

双链DNA探针

80年代末期，由康奈尔大学的Sanford最先提出，主要是为了克服以往各种基因转化技术的局限。

（3）所用动力系统：火药爆炸力

④表达：目的基因随载体同时被复制，转录，翻译

涂布

（6）活体电穿孔技术

放射免疫筛选过程

A、制备抗原：培养菌落

（噬菌斑）

B、制备抗体：免疫动物

C、抗原抗体反应

D、检测：放射自显影

E、选出重组体

方法：

①插入失活抗生素平板筛选法（pBR322系统）

由于外源DNA的插入引起抗药性失活——插入失活

（三）电激法(electroperation)

三、重组DNA导入动物细胞的方法

活体电穿孔法操作简单快速,电穿孔的时间只有几秒钟,而且DNA片段不需要特殊的纯化操作。

活体电穿孔法操作简单快速,电穿孔的时间只有几秒钟,而且DNA片段不需要特殊的纯化操作。

（一）载体介导的转化方法

（3）电穿孔转染技术

四、斑点杂交（Dotblot）

骨骼肌导入促红细胞生成素基因;（四）DNA接头连接法

接头的一端是齐平的，而另一端是某种内切酶的粘性末端;（五）PCR引入酶切位点;防止载体自身环化的措施

1、碱性磷酸酶脱磷酸基法