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再生医学免疫印迹技术员岗位考试试卷及答案
一、单项选择题（每题2分，共20分）
1.免疫印迹实验中，常用的转膜方法是（）
A.湿转B.干转C.半干转D.都不对
2.用于封闭免疫印迹膜的物质通常是（）
A.牛血清白蛋白B.抗体C.抗原D.核酸
3.免疫印迹中显色底物不包括（）
A.DABB.ECLC.考马斯亮蓝D.NBT/BCIP
4.SDS电泳中，SDS的作用是（）
A.分离蛋白B.使蛋白带负电C.显色D.固定蛋白
5.免疫印迹实验的正确流程是（）
A.电泳-转膜-封闭-一抗孵育-二抗孵育-显色
B.转膜-电泳-封闭-一抗孵育-二抗孵育-显色
C.电泳-转膜-一抗孵育-封闭-二抗孵育-显色
D.电泳-转膜-封闭-二抗孵育-一抗孵育-显色
6.通常免疫印迹中使用的一抗是（）
A.多克隆抗体B.单克隆抗体C.两者均可D.以上都不是
7.转膜时，膜与胶的放置顺序是（）
A.膜在胶上B.胶在膜上C.随意D.不需要膜
8.免疫印迹可检测的物质是（）
A.蛋白质B.核酸C.多糖D.脂肪
9.封闭的目的是（）
A.防止非特异性结合B.结合抗原C.结合抗体D.显色
10.免疫印迹实验中，电场方向是（）
A.正极到负极B.负极到正极C.无方向D.不确定
二、多项选择题（每题2分，共20分）
1.免疫印迹实验中需要用到的仪器有（）
A.电泳仪B.转膜仪C.恒温摇床D.离心机
2.影响免疫印迹结果的因素有（）
A.抗体质量B.蛋白上样量C.转膜效率D.显色时间
3.下列属于免疫印迹中常用的缓冲液有（）
A.Tris-HClB.PBSC.TBSD.EDTA
4.免疫印迹可应用于（）
A.蛋白表达分析B.蛋白分子量测定C.蛋白纯度分析D.蛋白相互作用研究
5.转膜的方式有（）
A.湿转B.半干转C.干转D.超声转
6.免疫印迹中一抗选择时需考虑的因素有（）
A.特异性B.亲和力C.来源D.浓度
7.封闭液的种类有（）
A.脱脂奶粉溶液B.牛血清白蛋白溶液C.明胶溶液D.蔗糖溶液
8.免疫印迹实验中可能出现的问题有（）
A.条带模糊B.背景过高C.无条带D.条带拖尾
9.显色方法包括（）
A.化学发光法B.底物显色法C.荧光显色法D.放射性显色法
10.免疫印迹实验中，蛋白样品制备的步骤包括（）
A.细胞裂解B.蛋白提取C.蛋白定量D.蛋白变性
三、判断题（每题2分，共20分）
1.免疫印迹只能检测一种蛋白。（）
2.转膜时间越长，效果越好。（）
3.封闭时间对免疫印迹结果没有影响。（）
4.一抗和二抗的孵育温度可以随意设定。（）
5.SDS电泳可以根据蛋白分子量大小分离蛋白。（）
6.免疫印迹实验中不需要对照。（）
7.不同来源的抗体在免疫印迹中效果相同。（）
8.显色底物一旦加入就不能停止反应。（）
9.蛋白上样量越多，条带越清晰。（）
10.免疫印迹可以检测蛋白质的修饰情况。（）
四、简答题（每题5分，共20分）
1.简述免疫印迹实验中封闭的原理。
答案：封闭是利用封闭剂（如脱脂奶粉、BSA等）填充免疫印迹膜上未结合蛋白的空白位点。这些封闭剂是一些大分子物质，能非特异性地吸附在膜表面，防止后续步骤中一抗、二抗等试剂非特异性结合到膜上，从而减少背景信号，提高检测的特异性和准确性。
2.列举SDS电泳的主要步骤。
答案：主要步骤：准备凝胶（包括分离胶和浓缩胶的配制与灌注）；将蛋白样品与上样缓冲液混合并加热变性；上样；接通电源进行电泳（先在较低电压下使样品进入分离胶，再提高电压至合适值继续电泳）；电泳结束后取出凝胶用于后续转膜等操作。
3.说明免疫印迹实验中选择二抗的要点。
答案：要点包括：二抗需与一抗的来源种属匹配，例如一抗是鼠源，二抗就应是抗鼠的抗体；二抗要有合适的标记，如辣根过氧化物酶（HRP）、碱性磷酸酶（AP）等，以便后续显色；二抗的亲和力要高，能高效结合一抗；同时要注意二抗的质量和效价，确保实验结果的可靠性。
4.免疫印迹实验中，条带背景过高可能的原因及解决方法。
答案：原因可能是封闭不充分、抗体浓度过高、洗涤不彻底。解决方法：延长封闭时间或更换封闭液；适当降低抗体浓度；增加洗涤次数和时间，确保未结合的抗体被充分洗去，降低背景信号干扰。
五、讨论题（每题5分，共20分）
1.讨论免疫印迹与其他蛋白检测方法相比的优势与局限性。
答案：优势在于能特异性检测蛋白，可分析蛋白表达量、分子量大小。能在复杂样本中识别目标蛋白，灵敏度较高。局限性在于操作相对复杂，实验周期较长；对样品纯度有一定要求，否则影响结果；抗体质量影响大，可能出现非特异性结合；只能半定量分析蛋白表达，难以精确定量。
2.当免疫印迹实验中出现无条带的情况，从实验各个环节分析可能的原因。
答案：从样品制备看，可能蛋白未有效提取或提取过程中蛋白降解。电泳环节，上样量过少、电泳条件不当致蛋白
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