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实验室技术操作规范指南制定日期：2025年3月适用范围：所有实验室操作人员安全是首要任务作者：

目录实验室安全基础掌握实验室安全知识，预防事故发生个人防护装备了解正确使用防护装备的方法实验室基本规则遵守实验室日常操作规范化学品处理安全处理各类化学品生物样本操作生物安全操作技术紧急情况处理掌握应急处理程序

实验室安全概述60%事故减少率源于规范操作90%可预防事故通过预防措施避免100%安全责任每位实验人员的义务安全文化建设是实验室长期发展的基石。人人参与，持续改进。

个人防护装备(PPE)实验服100%棉制阻燃材料，覆盖全身，袖口紧密护目镜防飞溅、防辐射，佩戴舒适，视野清晰手套不同材质适用于不同化学品，定期检查完整性面罩处理危险物质时必需，提供全脸防护

实验室基本规则饮食规定实验区域严禁饮食。指定休息区可进食。独立工作独自工作须经主管批准。确保紧急联系渠道畅通。清洁要求离开前清洁工作台面。使用75%酒精消毒。日常检查每日检查安全设备。确保洗眼器和紧急淋浴正常工作。

化学品存储原则相容性表格根据相容性表格存放化学品。避免危险反应。酸碱分离酸碱分离存放，距离至少20厘米。使用二次容器。易燃品存储易燃品专用防爆柜。温度控制在25°C以下。标签系统使用GHS标签系统。包含名称、危险信息和日期。

危险化学品处理MSDS查阅处理化学品前查阅物质安全数据表。了解危险特性和应急措施。浓酸稀释酸入水，缓慢加入并持续搅拌。避免溅出和过热。有机溶剂操作在通风橱内操作，风速保持在0.5m/s。避免吸入和皮肤接触。检漏程序定期检查容器完整性。使用专业检漏试剂或pH试纸。

生物安全操作1BSL-4最高等级，致命病原体2BSL-3高风险病原体3BSL-2中等风险病原体4BSL-1基础水平，低风险生物安全柜操作前检查气流。接种环灭菌需加热至红热。样本传递使用密封容器。

微生物操作技术无菌区域准备75%酒精消毒工作台，UV灯照射30分钟接种技术火焰消毒接种环，45°角操作培养基制备精确称量，121°C灭菌15分钟样本保存-80°C超低温保存，甘油保护

称量技术规范天平校准使用前校准，确保水平，检查砝码精度微量称量使用防静电设备，关闭通风，缓慢操作记录标准记录仪器编号，称量值，环境条件

移液器使用规范移液器类型选择0.5-10μL：DNA模板添加10-100μL：缓冲液分装100-1000μL：培养基分装1-10mL：大体积转移正确操作姿势垂直握持，眼睛平视刻度缓慢吸放，避免气泡使用前后检查吸头密封性定期校准，每季度一次精度要求CV值控制在1%以内每天使用前进行水测试避免移液器沾染液体不同溶液更换吸头

离心机操作规程平衡技术对称放置，误差小于0.1g使用天平确认重量一致转速控制微量管：13000rpm15ml离心管：5000rpm50ml离心管：4000rpm以下样品装载检查管壁完整性盖子拧紧，防止泄漏液体体积不超过管容量的3/4故障排除异常声音立即停机检查转子安装定期清洁腔体

显微镜使用规范调焦技术先用低倍物镜粗调再用高倍物镜微调调整光圈适应样品油镜使用滴加浸油于样品避免气泡形成使用完擦净油镜荧光显微镜避免长时间照射使用适合的滤光片避免样品光漂白清洁保养镜头纸擦拭避免有机溶剂接触使用后覆盖防尘罩

高压灭菌操作材料类型灭菌温度灭菌时间压力液体培养基121℃15分钟15psi固体物品121℃30分钟15psi废弃物121℃45分钟15psi敏感材料115℃30分钟10psi灭菌指示剂必须放置于物品中心位置。失败时检查门封、温度传感器和加热元件。

PCR技术操作规范样品准备使用专用区域和器材，防止DNA交叉污染程序设计根据引物Tm值设计退火温度，扩增片段决定延伸时间质量控制设置阴性、阳性对照，定期验证引物特异性反应体系配制在洁净工作台进行。试剂分装避免反复冻融。结果分析包括特异性和灵敏度评估。

电泳技术标准化凝胶配制DNA：0.8-2%琼脂糖蛋白：8-12%聚丙烯酰胺样品装载使用加样缓冲液缓慢加样避免溢出电压设置DNA：5-10V/cm蛋白：恒流20mA成像分析调整曝光时间使用Marker判断大小

细胞培养技术无菌操作要点层流速度维持在0.45m/s操作前30分钟紫外灯照射操作区域酒精喷洒消毒试剂瓶开口处火焰灭菌细胞传代流程PBS洗涤两次适量胰蛋白酶消化完全培养基终止消化计数后按比例接种污染处理立即隔离受污染培养物丢弃所有相关试剂彻底消毒工作区域记录并追踪污染源

HPLC操作规范系统平衡标准要求RSD小于2%。流动相使用0.22μm滤膜过滤。柱温控制精度±0.1°C。数据采集参数设置根据预期峰宽确定。结果分析包括峰面积、分离度和理论塔板数。

实验数据记录规范1记录本使用标准硬皮装订本，连续编号，不可撕页2数据记录格式日期、实验目的、材料方法、结果、结论3电子数据备