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卵泡液与HMG对人未成熟卵母细胞体外成熟培养的差异化影响及机制探究

一、引言

1.1研究背景与意义

在辅助生殖技术（ART）不断发展的当下，未成熟卵母细胞体外成熟培养（IVM）技术成为了关键的研究领域。随着ART的广泛应用，卵巢过度刺激综合征（OHSS）等并发症的发病率逐渐上升，对患者的健康构成了潜在威胁。与此同时，部分不孕症患者由于卵巢低反应或卵母细胞成熟障碍等问题，难以获得优质的成熟卵子，导致无法妊娠。因此，IVM技术的发展与完善显得尤为重要。

IVM技术指不经超促排卵或仅少量应用促性腺激素（Gn）后，从卵巢中获取未成熟卵，在体外经过适宜的条件进行成熟培养，使卵子成熟并具备受精能力。该技术为多囊卵巢综合征（PCOS）不孕患者开辟了新的治疗途径，减少了促性腺激素的使用，帮助了卵母细胞成熟障碍的患者获得妊娠。卵泡液和人绝经期促性腺激素（HMG）在IVM技术中发挥着关键作用。卵泡液中含有卵母细胞自然成熟所具备的全部成分和因子，已被证实具有显著的促进卵母细胞体外成熟的作用。HMG能够刺激卵巢中的卵泡发育，促进卵泡中的卵母细胞成熟，增加未成熟卵母细胞的获卵数，提高卵母细胞的成熟率和体外发育的能力。

深入研究卵泡液和HMG对人未成熟卵母细胞体外成熟培养的影响，对于提高IVM技术的成功率、改善不孕症患者的治疗效果具有重要意义。通过优化培养条件，能够为患者提供更有效的治疗方案，减轻患者的经济负担和身体痛苦，推动辅助生殖技术的进一步发展。

1.2研究目的与问题提出

本研究旨在深入探究卵泡液和HMG对人未成熟卵母细胞体外成熟培养的影响，通过系统的实验和分析，为IVM技术的优化提供理论依据和实践指导。具体而言，本研究试图回答以下问题：卵泡液单独作用于人未成熟卵母细胞体外成熟培养时，对卵母细胞的成熟率、受精率、卵裂率及优质胚胎率等有何影响？HMG单独作用时，又会产生怎样的效果？卵泡液和HMG联合使用时，是否会产生协同效应，从而进一步提高卵母细胞的体外成熟培养效果？若存在协同效应，最佳的使用浓度和组合方式是什么？

1.3国内外研究现状

国外在IVM技术及卵泡液、HMG对其影响的研究方面起步较早。早在1935年，Pincus和Enzmann就发现哺乳动物的卵子从囊状卵泡中取出后，可以在体外自发成熟到MII期。此后，相关研究不断深入。有研究表明，在IVM培养液中添加卵泡液，能够提高卵母细胞的成熟率和受精率。在对小鼠的实验中发现，添加卵泡液的实验组，卵母细胞成熟率显著高于对照组。关于HMG，众多研究证实其在促进卵泡发育和卵母细胞成熟方面的积极作用。从月经第3天开始，用rFSH150IU/d刺激连续使用3天，未成熟卵成熟率、种植率和临床妊娠率明显提高，这也间接说明了HMG类似作用的可能性。

国内对IVM技术的研究也取得了显著进展。安徽医科大学第一附属医院的研究团队探讨了人成熟卵泡液对人未成熟卵母细胞体外成熟及发育的影响，发现人成熟卵泡液能同时促进卵母细胞的胞质成熟，提高卵裂率、优质胚胎率及临床妊娠率。对于取卵前是否应用HMG或FSH，国内研究结果存在一定争议。有研究认为应用FSH或HMG刺激周期可提高卵母细胞的成熟率和妊娠率，也有研究认为取卵前不使用FSH可避免外源性促性腺激素对卵母细胞的潜在不良影响。

已有研究虽然在卵泡液和HMG对人未成熟卵母细胞体外成熟培养的影响方面取得了一定成果，但仍存在不足。部分研究样本量较小，结果的可靠性有待进一步验证。对于卵泡液和HMG联合使用的研究还不够深入，缺乏对最佳使用浓度和组合方式的系统探究。本研究将在已有研究的基础上，通过扩大样本量、优化实验设计，深入探讨卵泡液和HMG单独及联合作用对人未成熟卵母细胞体外成熟培养的影响，为IVM技术的临床应用提供更有力的支持，这也是本研究的创新点所在。

二、人未成熟卵母细胞体外成熟培养概述

2.1体外成熟培养的过程与技术要点

人未成熟卵母细胞体外成熟培养是一个复杂且精细的过程，从获取未成熟卵母细胞开始，便需要严格把控各个环节。获取未成熟卵母细胞主要有两种途径，一是在自然周期或使用少量促性腺激素刺激后，通过经阴道超声引导下穿刺抽吸卵巢内的小卵泡；二是从因良性妇科疾病而切除的卵巢组织中获取。在穿刺抽吸时，要注意控制抽吸压力和针头型号，较高吸取压力（大约为56mmHg）和较粗针头有利于卵母细胞恢复，将卵母细胞采集针反复在卵巢基质上抽吸的过程中逐渐增加抽吸压力，可采集到更多卵泡。

获取到的未成熟卵母细胞需在特定的培养环境中进行培养。培养环境要求严格，温度需维持在37℃左右，这是模拟人体内部的生理温度，有利于卵母细胞的正常代谢和发育；气体环境一般为5%CO