植物病毒检测方法指南.pptxVIP

任务2脱毒苗的病毒检测任务目标任务准备任务实施任务反思

1.了解病毒的指示植物检测法。2.了解病毒的血清学检测法。3.了解病毒的电子显微镜检测法。1.能利用指示植物进行病毒的检测。2.能利用电子显微镜检测法进行病毒检测。任务目标

一、直观检测法二、指示植物检测法三、血清学检测法四、电子显微镜检测法五、分子生物学检测法任务准备

一.直观检测法对于非潜隐性病毒，可以直接观察植株茎叶有无这一病毒可见的症状特征，这是一种最简便的方法，然而对于潜隐性病毒就需要更敏感的测定方法。

二.指示植物检测法（一）检测方法汁液涂抹法嫁接法

汁液涂抹法的操作步骤

二.指示植物检测法（二）对指示植物的要求应根据不同的病毒选择适合的指示植物；所选指示植物一年四季都容易栽培；能够在较长时期内保持对病毒的敏感性；容易接种；较广的范围内具有同样的反映。

二.指示植物检测法（三）指示植物检测法的优缺点优点：条件简单，操作方便，是一种经济有效的检测方法，所以大多数植物检测用指示植物检测法。缺点：不能测出病毒总的核蛋白浓度，而只能测出病毒的相对感染力。

三.血清学检测法（一）检测方法抗原的制备：病毒的接种繁殖→病叶的研磨→病毒的提纯。抗血清的制备：动物的选择和饲养→抗原的注射→抗血清的采集（采血）→抗血清的分离→抗血清的保藏。抗血清检测（免疫反应）：有叶绿体凝聚法、块茎沉淀法、环形接口法、酶联免疫法等方法。

三.血清学检测法（二）抗血清检测法的优缺点优点：特异性强，灵敏度高；操作简便、安全、快速；无需特殊仪器设备，结果容易判断；可同时检测大量的样品。缺点：抗血清来源困难，成本高，常规检测应用较少。

四.电子显微镜检测法病毒颗粒一般小于0.1um的微粒，人的眼睛观察不到，光学显微镜仅观察200nm的微粒，而电子显微镜则将分辨能力增大至0.5nm。

五.分子生物学检测法核酸杂交技术、聚合酶链式反应、双链RNA技术、环介导等温扩增技术、基因芯片技术。

香蕉分化芽中黄瓜花叶病毒(CMV)的检测一、目的与要求二、仪器用具与试剂三、方法与步骤四、评价与考核任务实施

了解香蕉分化芽中黄瓜花叶病毒(CMV)的检测方法。一、目的与要求。

1、仪器用具2、试剂及引物3、植物材料二、仪器用具与试剂。

1、检测样品选取取香蕉组培厂的香蕉分化芽，CMV的阳性对照分别是受CMV侵染的心叶烟和香蕉，阴性对照是健康香蕉苗。三、方法与步骤。

2、将香蕉分化芽的嫩叶取下0.2g，加2mL碳酸缓冲液（pH9.6）和10g/L的铜试剂磨碎，取100μL加到酶标孔中，同时加入阳性、阴性、空白对照，各重复2次，于4℃冰箱中保湿过夜。3、用PBST洗板3-5次，孵育4h，洗板；加酶标抗体，孵育4h；洗板，加入底物溶液，蔽光显色30min，于酶标仪上490nm处测定吸光值（D490nm）。三、方法与步骤

香蕉分化芽中黄瓜花叶病毒的检测评价与考核标准参照表5-3执行。四、评价与考核

1.简述香蕉分化芽中黄瓜花叶病毒(CMV)的检测流程。2.简述几种病毒检测方法的优缺点。任务反思