高级宠物克隆技术师面试题集.docxVIP

第PAGE页共NUMPAGES页

高级宠物克隆技术师面试题集

一、专业知识与理论（共5题，每题8分）

1.题：简述体细胞核移植（SCNT）技术的核心步骤及其在宠物克隆中的关键难点。

答案：SCNT技术核心步骤包括：①体细胞去核（移除卵母细胞核）；②核移植（将体细胞核注入去核卵母细胞）；③激活（电击或化学药物诱导细胞分裂）；④胚胎培养（体外发育至早期胚胎）；⑤胚胎移植（移植至代孕母体）。关键难点包括：①核质互作异常（克隆后代发育异常）；②染色体失配（遗传物质不稳定性）；③低效率胚胎发育（体外培养成功率低）。

2.题：列举三种影响宠物克隆成功率的生物技术因素，并说明其解决方案。

答案：①卵母细胞质量：低成熟度或退化卵母细胞会导致克隆失败。解决方案：优化卵母细胞采集时机（麻醉下微创手术），提高体外成熟率（添加生长激素或抑制因子）。

②体细胞遗传稳定性：老化的体细胞DNA损伤增加。解决方案：筛选年轻（5岁）或冷冻保存的体细胞，减少端粒缩短。

③胚胎培养环境：培养液成分或温度不适宜。解决方案：采用动态气体控制系统（CO?/氧气比例调节），模拟子宫环境。

3.题：比较“卵裂球内注射”（IVI）与“显微注射”（MI）两种胚胎移植技术的优缺点，并说明其适用场景。

答案：①IVI（机械混合）：优点是操作快速、成本低；缺点是易损伤胚胎，适合大批量实验。适用场景：基础研究或低成本克隆项目。

②MI（显微操作）：优点是精准、损伤小；缺点是设备昂贵、耗时。适用场景：高端商业克隆（如纯种犬、猫）。

4.题：解释“体细胞核移植后代的健康隐患”，并举例说明如何通过基因检测预防。

答案：常见隐患包括：①宫内发育迟缓（胎盘功能异常）；②代谢疾病（基因重复或失活）；③肿瘤发生率增加（端粒酶激活失控）。预防方法：

-产前超声监测胎盘发育；

-基因检测（如全外显子组测序）筛查遗传缺陷（如猫的HCM基因）；

-冷冻保存原主人细胞，若后代出现健康问题可对比分析。

5.题：描述“代孕母体选择标准”及其对克隆成功率的影响。

答案：标准包括：①年龄（6岁）、健康（无传染病或遗传病史）、生殖史（自然分娩或人工授精经验）；②激素水平（促卵泡素、孕酮正常）；③体型匹配（体重、骨架与克隆后代协调）。影响：代孕母体状态直接影响妊娠维持率和后代出生健康。

二、实操技能与设备（共4题，每题10分）

1.题：操作体细胞去核时，如何避免卵母细胞破裂？请说明关键步骤和注意事项。

答案：关键步骤：①显微镜下定位卵母细胞，用显微针轻触第一极体边缘（避免压迫）；②缓慢抽吸（负压≤-80mmHg），边抽边轻柔移动针尖；③确认核被吸出后立即注入体细胞。注意事项：①针尖钝化（斜角处理减少刺穿风险）；②操作时间控制在30秒内（卵母细胞耐受性有限）。

2.题：列举三种克隆实验室的精密设备，并说明其功能。

答案：①显微操作系统：用于SCNT的核移植和胚胎注射；②实时荧光培养箱：监测CO?、温度、湿度动态平衡；③流式细胞仪：检测卵母细胞成熟度（如MII期比例≥85%）。

3.题：描述胚胎移植术后代孕母体的护理要点。

答案：①激素调控（注射孕酮维持黄体功能）；②营养补充（高蛋白饲料，避免剧烈运动）；③定期超声监测（7-10天确认妊娠，28天复查胎心）；④隔离观察（产后3天防应激）。

4.题：若克隆胚胎在体外培养时出现“空泡化”现象，可能的原因有哪些？如何补救？

答案：原因：①激活过度（电击电压过高）；②培养液渗透压失衡（如蔗糖残留）；③病原体污染（支原体）。补救：①降低电击参数；②更换新鲜培养液（含抗渗透剂）；③PCR检测病原并灭菌。

三、行业法规与伦理（共3题，每题12分）

1.题：中国《动物遗传资源管理条例》对宠物克隆有何限制？

答案：①禁止商业化繁殖（仅限科研或种源保存）；②克隆后代需登记（如犬类需标注“克隆”标识）；③禁止用于食品或商业繁殖用途；④境外引进的克隆体细胞需备案。违规者可处5万元以下罚款。

2.题：解释“动物克隆的伦理争议”，并给出技术师应如何应对。

答案：争议点：①动物福利（高流产率、发育缺陷）；②市场误导（夸大效果）；③法律界定（克隆后代继承权）。应对：①公开透明报告成功率；②推广“辅助生殖”（如体外受精）替代方案；③参与行业伦理委员会（如AVMA指南）。

3.题：若客户要求克隆已故的中华田园犬，应如何沟通并解释技术限制？

答案：①告知法律限制（非纯种犬不纳入商业名录）；②技术风险（成功率约40%，后代可能健康隐患）；③替代方案（如保存体细胞用于未来研究）；④强调动物伦理（避免“情感绑架”技术）。

四、案例分析（共2题，每题15分）

1.题：某客户送检5岁波斯猫的耳尖细胞，要求克隆，但实验室仅支持体外受精技术。如何说服客户并设计替代方案？

答案：①分