（39页PPT）单基因病致病基因的鉴定.pptVIP

南方医科大学基础医学院医学遗传学教研室商璇Ph.D，.edu本章主要内容:功能克隆定位克隆基于高通量测序技术的致病基因的鉴定单基因病的研究策略临床诊断、家系调查与材料收集侯选基因的确定已知致病基因突变位点的确定连锁分析与未知基因的基因定位基因型与表现型相关性研究发病机制的研究临床诊断查阅相关资料，认识不同遗传病患者临床表现及其辅助诊断措施临床诊断：症状和体征常规辅助检测指标特殊诊断指标家系调查与系谱分析调查家系三代以上所有相关成员的信息根据调查资料，用系谱中常用的符号绘制成系谱系谱分析：区别遗传病与非遗传病区别单基因与多基因病判断遗传方式遗传病家系特点散发病例：对于遗传病，包括单基因遗传病，多数病例表现为散发。小家系病例：在有家族史的病例中，多数也是小家系。大家系病例：极少数家系发病个体多，涉及3-4代都有患者。大家系散发病例收集材料采集样品：外，颊粘膜脱落细胞，毛囊,患者组织（如可以取材），羊水（产前诊断）采集家系应做到尽可能完整患者、同一家系中有相同遗传背景的表型正常的其他个体、该家系中其他遗传背景的成员临床资料采集患者临床上一系列指标的检测，相关信息和影象资料保存，患者血清或组织的保存及其酶、病理或免疫学研究候选基因的鉴定数据库检索OMIM等数据库根据疾病名称检索根据基因检索最新发表物检索患者临床信息可能定位的染色体区域确定已知致病基因突变从数据库中查阅目的基因的相关信息获得已知基因基因组序列设计引物或参考文献中引物根据文献，采用合适方法进行突变分析PCR-测序分析某个基因，发现错义突变:c.281GA,其所在密码子由CGG变为CAG,编码氨基酸由精氨酸变为谷氨酰胺。查阅文献资料，c.281GA为已知致病突变位点，可判断其为该患者的致病突变位点。如果是未知疾病呢？*功能克隆定位克隆基于高通量测序技术的致病基因的鉴定第一节功能克隆*通过基因的功能（编码蛋白）而不依赖定位的信息来分离基因的策略第一个疾病致病基因通过此策略发现范例：镰状细胞贫血的β-珠蛋白基因苯丙酮尿症的苯丙氨酸羟化酶基因流程示意图**甲型血友病遗传方式：XR发病率：1/10,000（男）病因：FⅧ基因遗传性缺陷(缺失、点突变、插入、重复、倒位)?基因定位：Xq28?基因全长186kb，含26个外显子?临床表现：外伤后出血不止，关节血肿*☆FⅧ因子基因的功能克隆功能克隆是从蛋白质着手进行基因克隆的策略。Ⅷ因子多肽不同多肽片段蛋白酶消化分离氨基酸序列测定设计合成寡核苷酸筛选cD*通过动物模型鉴定疾病基因*第二节定位克隆*基于染色体异常的基因定位连锁分析确定致病基因确定遗传病基因突变的定位克隆策略*基于染色体异常的基因定位 利用被定位的基因与在同一染色体上另一遗传座位相连锁的特点，将该基因定位在某一染色体或染色体某一区带上。连锁分析注：适于分析较大的遗传病家系，不适于散发病例和小家系病例连锁重组遗传标记进行连锁分析时需要的一些已知遗传位点，这些位点应按方式遗传，且具有多态性以便显示连锁关系，这些标记位点称为遗传标记RFLP，STR,SNP连锁分析结果*确定致病基因突变筛查：在家系中该突变与表型共分离是最主要的证据表型拯救：有些导致疾病的突变通常引起基因功能的丧失，而且其表型是可逆的。如果从一个患者的细胞中能够发现基因突变的表型，我们就可以检测转染了候选基因野生型等位基因的表达载体是否能够“拯救”突变并恢复正常的表型建立疾病的小鼠模型：如果能够在某一家系中确定一个致病基因，但又无法利用更多的无关患者来验证，通过构建小鼠模型来验证。对于功能丧失性突变导致的表型可以通过制作基因敲除（knock-out）小鼠。对于功能获得性突变导致的表型或者突变效应不清楚的表型，可以制作突变基因敲入（knock-in）模型**Duchenne型肌营养不良（Duchennemusculardystrophy,DMD）遗传方式：XR发病率：1/3400（男）临床表现：双下肢肌无力、