DB3715_T 41-2023 羊肚菌液体菌种制备技术规程.docxVIP

ICS65.020CCSB05

3715

聊城市地方标准

DB3715/T41—2023

羊肚菌液体菌种制备技术规程

2023-10-7发布2023-11-7实施

聊城市市场监督管理局发布

I

DB3715/T41—2023

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。

本文件由聊城市农业农村局提出、组织实施并归口。

本文件起草单位：聊城市农业技术推广服务中心、莘县农业农村综合服务中心、聊城市东昌府区农业技术推广服务中心、聊城市农业科学院、临清市青年路街道办事处农技站、阳谷县农业技术推广服务中心、山东蒙恩现代有限公司。

本文件主要起草人：李莉、刘芳、吴怀英、宋凌云、王泽奇、姜新、张静、杨红燕、申铜飞、刘晶、张素芳、王远亮、赵岑、何小春、苏静、王凤改、王光勇、付成龙。

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羊肚菌液体菌种制备技术规程

1范围

本文件规定了羊肚菌液体菌种制备的术语和定义、生产要求、生产技术和档案管理等要求。

本文件适用于羊肚菌液体菌种的制备。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB150压力容器

GB5749生活饮用水卫生标准

GB50073洁净厂房设计规范

NY/T528食用菌菌种生产技术规程

NY/T1935食用菌栽培基质质量安全要求

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

液体菌种发酵罐liquidstrainfermentationtank

食用菌液体菌种培养的专用发酵设备，设备应符合GB150要求。

3.2

接种抢inoculationgun

将液体菌种按无菌操作要求由发酵罐接种到固体培养机物料上的工具。

4生产要求

4.1人员要求

工作人员应该保持个人卫生，进液体菌种发酵车间必须穿戴经灭菌处理的工作服、口罩、鞋、帽。

4.2产地环境要求

4.2.1场所要求

生产场所应场地开阔、路面硬化、卫生清洁，符合NY/T528的环境卫生要求，水源水质符合GB5749要求。

4.2.2厂房要求

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厂房设计应符合NY/T528要求，发酵罐菌种培养室应符合GB50073要求。冷却区应卫生干净、接种区应正压无菌、培养室应能控温、通风。

4.3生产设备与设施

4.3.1生产设备与用具

磅秤、天平、高压蒸汽灭菌锅、发酵罐、水净化处理设备、恒温摇床、超净工作台、调温设备、除湿设备、恒温培养箱、冰箱、显微镜等及常规用具。压力容器，应经政府有关部门检验合格，符合GB150要求。应具有备用电源。

4.3.2基本设施

发酵罐菌种培养室应有调温、通风设施，空间洁净度应达到百级。菌种检验室有相应的实验检测设备、制种用的灭菌设施和常规用具。

5生产技术

5.1工艺流程

母种制备→摇瓶液体菌种制备→发酵罐液体菌种生产→放罐接种

5.2母种制备

母种制备应符合NY/T528的规定。

5.3摇瓶液体菌种制备

5.3.1培养基制备

培养基按下列配方配制，豆粕0.5%，葡萄糖2%，磷酸二氢钾0.3%，硫酸镁0.15%，原料应符合NY/T1935的规定。取定量的纯水放入烧杯，煮沸后将上述原料按比例依次倒入烧杯中完全溶解,制成培养液，冷却备用。

5.3.2摇瓶装液量

采用1000mL三角瓶，装液量为500mL用纱布和牛皮纸封口。

5.3.3灭菌

采用高温高压灭菌，在121℃,压力约1.5g/m2条件下保持30min。

5.3.4接种

培养基冷却至常温，在无菌条件下将3～4块2cm3的母种菌块接入摇瓶内。

5.3.5培养

静置48h后置于恒温摇床，24℃~25℃、140r/min～160r/min，培养4d～6d。摇瓶液体菌种培养液应澄清透明，无杂菌、无异味；镜检无杂菌、菌丝浅白色且色泽均匀、形态正常；菌丝球密度达70%～80%，菌丝球较小且均匀（菌球直径小于0.5cm），菌丝体生物量大于8g/L，均匀悬浮于液体培养基中，不分层。

5.3.6贮存

DB3