鸭疫里默氏杆菌AS87_08785基因编码的GldK在Ⅸ型分泌系统中的功能与机制探究.docxVIP

鸭疫里默氏杆菌AS87_08785基因编码的GldK在Ⅸ型分泌系统中的功能与机制探究

一、引言

1.1研究背景与意义

鸭疫里默氏杆菌（Riemerellaanatipestifer，RA）是一种严重危害水禽养殖业的病原菌，可导致雏鸭、雏鹅等多种禽类发生急性或慢性、接触性、败血性传染病，给全球养禽业造成了巨大的经济损失。随着养禽业规模化、集约化的发展，鸭疫里默氏杆菌病的发病率和死亡率呈上升趋势，严重制约了养禽业的健康发展。

Ⅸ型分泌系统（TypeⅨSecretionSystem，T9SS）是近年来发现的一种新型蛋白分泌系统，广泛存在于拟杆菌门细菌中。T9SS在细菌的致病性、滑动运动、生物膜形成以及蛋白分泌等过程中发挥着重要作用。GldK是T9SS的一个关键功能组分，参与了细菌的滑动运动和蛋白分泌等过程。然而，目前关于鸭疫里默氏杆菌中GldK基因与T9SS的关系及其在细菌致病过程中的作用机制尚不清楚。

深入研究鸭疫里默氏杆菌AS87_08785基因编码的GldK蛋白，有助于揭示T9SS在鸭疫里默氏杆菌致病过程中的作用机制，为开发新型疫苗和治疗药物提供理论基础，对有效防控鸭疫里默氏杆菌病具有重要的科学意义和应用价值。

1.2鸭疫里默氏杆菌概述

鸭疫里默氏杆菌属于巴氏杆菌科里氏杆菌属，是一种革兰氏阴性杆菌。菌体呈杆状或椭圆形，多为单个，少数成双或短链排列，无芽孢，无鞭毛，不能运动，可形成荚膜。该菌对营养要求较高，在普通培养基和麦康凯培养基上不生长，在巧克力或胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）平板上，呈圆形、微突起、表面光滑、奶油状小菌落。生化试验大多阴性，不发酵葡萄糖和蔗糖，可与多杀性巴氏杆菌相区别。鸭疫里默氏杆菌具有多个血清型，目前已报道的有21个血清型，以阿拉伯数字表示，我国分离的菌株多数属1型。

鸭疫里默氏杆菌的宿主范围广泛，主要感染雏鸭、雏鹅、雏火鸡等多种禽类，其中雏鸭最为易感，尤其是2-3周龄的雏鸭。感染鸭疫里默氏杆菌的禽类主要表现为急性或慢性的败血症和浆膜炎。急性感染时，病禽精神沉郁、食欲减退、眼鼻分泌物增多、腹泻、共济失调，甚至死亡；慢性感染时，病禽出现关节肿胀、跛行、生长迟缓等症状。剖检可见纤维素性心包炎、肝周炎、气囊炎、脑膜炎等典型病变。例如，在我国山东、河南等地的肉鸭养殖场，曾多次爆发鸭疫里默氏杆菌感染，导致大量雏鸭死亡，给养殖户带来了惨重的经济损失。

鸭疫里默氏杆菌主要通过呼吸道和消化道传播，污染的饲料、水源、设备等也可成为传播媒介。在养殖过程中，饲养密度过大、通风不良、卫生条件差等因素均可增加鸭疫里默氏杆菌病的发生风险。

1.3Ⅸ型分泌系统（T9SS）简介

1.3.1T9SS的发现与分布

T9SS最早于2010年在牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonasgingivalis）和约氏黄杆菌（Flavobacteriumjohnsoniae）中被发现。研究者通过比较牙龈卟啉单胞菌菌株ATCC-33277与W83的基因组，发现某些基因组不编码已知的任何一种分泌系统蛋白质，进而利用基因同源重组原理和韦恩图鉴别分析，确定了这一新型分泌系统的存在。

T9SS是一个仅限于拟杆菌门的多蛋白复合体，目前已证实其广泛存在于拟杆菌门中，特别是在牙周致病菌、嗜纤维菌属、黄杆菌属等细菌中。除了牙龈卟啉单胞菌和约氏黄杆菌外，福赛斯坦纳菌、黄褐二氧化碳嗜纤维菌、中间普雷沃菌等细菌中也存在T9SS。在不同的细菌中，T9SS的组成和功能可能存在一定的差异，但都与细菌的致病性、滑动运动、生物膜形成以及蛋白分泌等过程密切相关。

1.3.2T9SS的结构组成

T9SS是一个结构复杂的多蛋白复合体，包括内膜、外膜、周质等相关蛋白。以牙龈卟啉单胞菌的T9SS为例，至少由34种包含C端保守结构域（C-terminalconserveddomain，CTD）的蛋白组成，主要包括PorK、PorL、PorM、PorN、PorP、PorQ、PorT、PorU、PorV、PorW、PorX、PorY和Sov等。

内膜蛋白：PorL、PorM存在于内膜上，PorL由跨膜螺旋和细胞质结构域（PorLC）组成，PorM由跨膜螺旋和周质结构域（PorMP）组成。PorM是跨周质核心复合体的核心成分，连接内膜（PorL-PorM）和外膜（PorK-PorN）复合物，其通过与PorL的相互作用，将一端锚定于内膜。

外膜蛋白：PorK、PorP、PorN、PorU、PorW、PorV、Sov等通过T9SS转定位于外膜上。其中，PorK和PorN在周质侧的外膜附近以1∶1化学计量比相互作用，形成一个直径50