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包埋-脱水法常低温保存绿藻的效果与机制研究

一、引言

1.1研究背景

绿藻作为一类重要的单细胞微藻，在生态系统中发挥着举足轻重的作用。它们广泛分布于各类水体、土壤表面以及树干上，尤其是在淡水中最为常见。绿藻具有多样的体型和形态，从微小的单细胞体到巨大的多细胞体，常见的有绿色圆球形细胞体和长条形细胞体，它们能在水中自由漂浮。作为光合生物，绿藻通过光合作用制造自身所需的有机物质，同时释放氧气，为水域中其他生物提供了必要的生存条件，在维持水体生态平衡方面意义重大。

如今，绿藻已成为一种极具潜力的生物资源，在众多领域展现出广阔的应用前景。在生物工程领域，绿藻可用于生产生物燃料，其生长速度快、光合效率高的特点，使其有望成为解决能源问题的重要途径之一；在食品领域，部分绿藻如石莼、礁膜、浒苔等，历来是沿海人民广为采捞的食用海藻，海产扁藻、小球藻等单细胞绿藻含有一定量的蛋白质、糖类、氨基酸和多种维生素，可直接作为食品或用于提取相关营养成分；在化妆品领域，绿藻中的某些成分具有抗氧化、保湿等功效，被应用于护肤品的研发中。

然而，在绿藻的应用过程中，其保存问题至关重要。合适的保存方法能够确保绿藻在需要时保持活性和功能，为后续的研究和应用提供保障。包埋-脱水法是绿藻保存中比较常用的一种方法。该方法先采用不同浓度的甲醛作为固定剂，将绿藻固定在琼脂中，随后用不同浓度的乙醇进行脱水处理，最后进行常温或低温保存。特别是在低温保存方面，包埋-脱水法操作相对简单，成本较低，具有经济实用性。但目前，该方法在绿藻保存方面的应用仍存在一定的研究空白，对于不同绿藻在该方法下常温和低温保存的具体效果及生存性状特征变化规律，还缺乏深入系统的研究。

1.2研究目的与意义

本研究旨在深入探究包埋-脱水法在常温和低温条件下对两种绿藻的保存效果，以及保存后绿藻的生存性状特征变化规律。具体而言，一方面，通过设置不同的温度条件（常温、低温），运用包埋-脱水法对两种绿藻进行保存处理，定期检测绿藻的存活率等指标，明确该方法在不同温度下对绿藻的保存效果差异；另一方面，对保存后的绿藻进行形态特征观察、色素组成分析、生长速度测定等，全面了解其生存性状特征的变化情况，并分析这些变化产生的内在机制。

从理论意义来看，本研究有助于深化对包埋-脱水法保存绿藻机制的理解，丰富绿藻保存技术的理论体系，为进一步优化保存方法提供科学依据。从实际应用价值而言，明确包埋-脱水法常温和低温保存绿藻的最佳条件及效果，能够为绿藻在生物工程、食品、化妆品等领域的应用提供稳定可靠的藻种来源，推动绿藻产业的发展，具有重要的实践指导意义。

1.3国内外研究现状

在国外，对于包埋-脱水法保存藻类的研究开展较早，涉及多种藻类的保存尝试。一些研究关注了不同固定剂和脱水剂组合对藻类保存效果的影响，发现合适的固定剂和脱水剂能够有效提高藻类在保存过程中的存活率。在低温保存方面，研究人员探讨了不同低温条件下藻类的生理变化和细胞结构损伤情况，发现过低的温度可能导致藻类细胞内冰晶形成，破坏细胞结构，影响保存效果。

国内在包埋-脱水法保存绿藻方面也有一定的研究成果。有研究以盐生杜氏藻和青岛大扁藻为对象，探究了保存温度、光（暗）、胶球含水量、藻细胞密度、密封袋内空间体积和密封袋外膜材质等因素对保存效果的影响。结果表明，不同因素对两种绿藻的保存效果存在显著差异，如在4℃暗下，当胶球藻细胞密度为一定值时，青岛大扁藻可达到较高的存活率。然而，当前国内外研究仍存在一些不足。多数研究仅针对单一因素对绿藻保存效果的影响，缺乏多因素综合作用的系统分析；对于保存后绿藻生存性状特征的变化规律，研究还不够全面深入，特别是在分子层面的研究较为欠缺。此外，不同研究之间的实验条件和方法差异较大，导致研究结果难以直接比较和整合，限制了对包埋-脱水法保存绿藻技术的全面认识和推广应用。

二、材料与方法

2.1实验材料

本实验选取盐生杜氏藻（Dunaliellasalina）和青岛大扁藻（Platymonashelgolandicavar.tsingtaoensis）作为研究对象。盐生杜氏藻属于绿藻纲团藻目杜氏藻科杜氏藻属，是一种单细胞真核绿藻，无细胞壁，细胞形态易变，通常呈梨形、椭圆形等。它对盐度具有极强的耐受性，可在高盐环境中生存，广泛分布于海洋、盐湖等高盐水域。青岛大扁藻隶属于绿藻门绿藻纲团藻目衣藻科扁藻属，细胞呈长椭圆形，前端较宽阔，具有4条等长的顶生鞭毛。其对环境的适应能力较强，生长速度较快，是海洋生态系统中的重要初级生产者，常见于沿海海域。

选择这两种绿藻作为实验材料，主要基于以下原因。一方面，它们在绿藻中具有一定的代表性，盐生杜氏藻特殊的耐盐特性使其在研究藻类对极端环境适应机制方面具有重要价值；青岛