T∕CACM 012-2016 金钱白花蛇快速 PCR 鉴定.docxVIP

ICS:11.120.99C10/29

团

体

标

T/CACM0122016

金钱白花蛇快速PCR鉴定

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2016-12-12发布2016-12-12实施

中华中医药学会发布

目次

前言 玉

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4方案 2

5仪器设备 2

6试剂和溶液配制 2

7检验程序 3

8结果判定 4

9结果报告 4

10质量保证 4

11废弃物处理 4

附录A(资料性附录)金钱白花蛇快速PCR鉴定体系的建立 5

前言

本标准的全部技术内容为推荐性。

本标准是对《中华人民共和国药典》标准的补充。

本标准由中华中医药学会归口。

本标准起草单位:中国中医科学院中药资源中心、广东省食品药品检验所。

本标准主要起草人:袁媛、黄璐琦、李华、蒋超、杨志业、赵玉洋、何雅莉。

请注意本标准的某些内容有可能涉及专利,本标准的发布机构不应承担识别这些专利的责任。

玉

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T/CACM012—2016

金钱白花蛇快速PCR鉴定

1范围

本标准规定了使用快速PCR鉴定金钱白花蛇药材和饮片的通用方法和要求。

本标准适用于金钱白花蛇药材和饮片鉴定。

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。

《中华人民共和国药典》(2015年版)

GB/T6682《分析实验室用水规格和试验方法》

GB/T23632《进境植物检疫截获有害生物鉴定复核规程》

GB/T27403《实验室质量控制规范食品分子生物学检测》

3术语和定义

下列术语和定义适用于本标准。

3.1

送检样品testsample

按一定规则取自某一整体的一个或多个部分,并能反映该整体的相关信息,可以作为判断该整体的基础。

3.2

DNA提取DNAextraction

从样品提取出DNA的方法。

3.3

DNA扩增DNAamplification

通过一定技术使一段特定的DNA片段拷贝数增加的过程,可通过聚合酶链式反应技术实现。

3.4

聚合酶链式反应polymerasechainreaction(PCR)

模板DNA先经高温变性为单链,两条引物分别与模板DNA两条链上相应的一段互补序列发生退火,在DNA聚合酶的作用下,以四种脱氧核糖核酸(dNTP)为底物,使退火引物得以延伸,然后不断重复变性、退火和延伸这一循环,使位于两段已知序列之间的DNA片段拷贝数呈几何倍数扩增。其扩增产物可通过多种特异性和敏感性好的方法进行分析。

3.5

阳性对照positivecontrol

一般使用对照药材代替送检样品同法DNA提取、靶核酸扩增和产物检测过程,用于证明鉴定过程可获得目标核酸片段的操作。

3.6

阴性对照negativecontrol

使用常见伪品药材代替送检样品同法DNA提取、靶核酸扩增和产物检测过程。

3.7

空白对照blankcontrol

以水代替送检样品同法DNA提取、靶核酸扩增和产物检测过程,用以证明提取过程中没有核酸

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T/CACM012—2016

污染。

4方案

金钱白花蛇快速PCR鉴定应采用抽取有代表性的送检样品与对照药材比较的验证方式,即依据金钱白花蛇特异性DNA序列进行鉴定。利用碱裂解法提取金钱白花蛇模板DNA,以提取的DNA为模板进行PCR扩增,荧光检测或琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物。

5仪器设备

5.1仪器设备

所有制备样品使用的器具在使用前应灭菌处理。

5.1.1PCR仪

使用前应进行温度校准。