薄层色谱法操作与技术.pdfVIP

方法：

薄层色谱法系将供试品溶液点于薄层板上，在展开容器内用展开剂展开，使供试品所含成分分

离，所得色谱图于适宜的对照物按同法所得的色谱图比较，并可用薄层扫描仪进行扫描，用于

鉴别、检查及含量测定。

适用范围：

本适用于薄层色谱检查。

职责：

操作人员：

➢严格按照此规程要求进行操作。

岗位主管：

➢起草文件，并确保操作程序的准确性、技术内容的完整性及文件的及时更新；

➢监督操作规程是否与实际过程一致，资源是否满足要求；

➢培训，确保此操作规程的正确实施。

程序：

1：术语解释

1.1：薄层板是在板基上铺一层吸附剂（或者吸干了固定相的载体）而形成的层析版。

1.2仪器与材料

1.2.1薄层板

市售薄层板市售薄层板分普通薄层板和高效薄层板，如硅胶薄层板、硅胶GF254薄层板、

聚酰胺薄膜。

薄层板在保证色谱前提的条件下，如需对薄层板进行特殊处理和化学改性，以适应

供试品分离的要求时，也可用的薄层板。最常用的固体相有硅胶G、硅胶GF254、

硅胶H、硅胶HF254、微晶纤维素等，其颗粒大小，一般要求颗粒为10～40um，加水或用羧甲

基纤维素钠液（0.2%～0.5%）适量调成糊状，均匀涂布与玻板上。使用涂布器涂布应能使固定

相在玻板上涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。玻板应光滑、平整，洗净后不附水珠。

1.2.2点样器一般采用微升毛细管或手动、半自动、全自动点样器材。

1.2.3展开容器

上行展开一般可用适合薄层板大小的平底或双槽展开缸，展开时需能密闭。水平展开

用的水平展开缸。

1.2.4显色剂见各品种项下的规定。可采用喷雾显色、浸渍显色或置适宜试剂的蒸气中熏蒸

显色，用以检出斑点。

1.2.5显色装置

喷雾显色应使用玻璃喷雾瓶或喷雾器，要求用压缩气体使显色剂呈均匀细雾状喷出；

浸渍显色可用玻璃器械或用适宜的展开缸代用；蒸汽熏蒸显色可用双槽展开缸或用适宜大

小的干燥器代替。

1.2.6检视装置

为装有可见光、254nm和365nm紫外光光源及相应的滤光片的暗箱，可附加设备供拍

摄图象用，暗箱内光源应有足够的光照度。

1.2.6薄层色谱扫描仪系指用一定波长的光对薄层板上有吸收的斑点，或经激发后能出

荧光的斑点，进行扫描，将拍摄得到的图谱和积分数据用于物质定性或定量的分析仪器。

1.3操作方法

1.3.1点样

除另有规定外，在洁净干燥的环境，用毛细管点样于薄层板上，一般为圆点状，点样

基线距底边10～15MM。圆点状直径一般不大于3mm；接触点样时注意勿损伤薄层板表面。（可

用半自动或自动点样器械喷雾法点样，点间距离可视斑点扩散情况及相邻斑点互不影响为

宜，一般不少于8mm）。

1.3.2展开

将点好供试品的薄层板放入展开缸中，浸入展开剂的深度为距原点5mm为宜，密闭。除另

有规定外，一般上行展开8～15cm。溶剂前沿达到规定的展距，取出薄层板，晾干，待检验。

注：展开前如需用溶剂蒸气预平衡后，可在展开缸中加入适宜量的展开剂，密闭，一般保持

15～30分钟。溶剂蒸气预平衡后，应迅速放入载有供试品的薄层板，立即密闭，展开。如需使

展开缸达到溶剂蒸气饱和的状态，则需在展开缸的内侧放置于展开缸同样大小的滤纸，密闭一

定时间，使达到饱和在如法展开。必要时，可进行二次展开或双相展开。

1.3.3显色与检视

供试品中含有可见光下有颜色的成分可直接在日光下检视，也可用喷雾法或浸渍法以适宜的

显色剂显色，或加热显色，在日光下检视。有荧光的物质或遇某些试剂可激发荧光的物质可在

365nm紫外光灯下观察荧光色谱。对于可见光下物色，但在紫外光下有吸收的成分，可用带有

荧光剂的硅胶板，在254nm紫外光灯下观察荧光板面上的荧光猝灭物质形成的色谱。

1.4判定方法

除另有规定外，薄层色谱法鉴别可在薄层板上直接检视。由于影响薄层分离的因素很多，

一般采用对照品在同一薄层板上进行对比的方法。供试品在色谱中所显主板点的位置，应与对

照品在色谱中所显的主板点相同。在供试谱中，与对照色谱的相应位置上，应显相同颜