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高原鼠兔低氧性肺血管收缩钝化相关基因的比较转录组解析与验证

一、引言

1.1研究背景

青藏高原，作为世界屋脊和地球第三极，平均海拔超过3000米，其独特的地理环境造就了低氧、寒冷等极端气候条件。低氧环境对生物的生存构成了巨大挑战，氧气分压的降低使得生物获取足够氧气以维持正常生理功能变得困难重重。在这种环境下，生物需要通过一系列复杂的生理、生化和遗传机制来适应低氧，以确保生存和繁衍。

高原鼠兔（Ochotonacurzoniae）是青藏高原特有的小型哺乳动物，它们在海拔3000-5000米的区域广泛分布，是研究生物对高原低氧环境适应机制的理想模型。经过长期的进化，高原鼠兔形成了多种适应策略，其中低氧性肺血管收缩反应钝化（bluntedHypoxicPulmonaryVasoconstriction,bHPV）是其重要的适应特征之一。

正常情况下，当机体处于低氧环境时，肺血管会发生收缩，即低氧性肺血管收缩（HypoxicPulmonaryVasoconstriction,HPV），这是一种重要的生理调节机制，旨在减少通气不良区域的血流量，使血液重新分配到通气良好的肺泡，从而优化通气血流比，提高氧气摄取效率。然而，在高原鼠兔中，这种低氧性肺血管收缩反应显著减弱，即表现为bHPV。研究表明，高原鼠兔的肺动脉树呈现薄壁结构，肺小动脉平滑肌缺乏，较小的肺动脉（100μm）仅由一弹力纤维层组成。这种特殊的血管结构使得高原鼠兔在低氧环境下，肺血管阻力不会显著增加，从而避免了因肺动脉高压导致的右心负荷过重等问题。例如，长期低氧会使大鼠等动物的肺小动脉中层肥厚，无肌型肺小动脉出现平滑肌层，成为新肌化血管，进一步促进肺动脉压力增加，严重时可导致右心衰竭；而高原鼠兔经过自然选择失去了这种低氧性肺血管收缩反应，无右室肥厚，右心室/左心室+室间隔比值（RV/LV+S）仅为0.21-0.23，远低于低氧30天的大鼠（0.40-0.50）。此外，高原鼠兔肺组织和血管内皮细胞的一些特性也与其bHPV有关。肺组织和血管内皮细胞是分泌和合成血管活性物质的重要场所，可合成并释放具有舒缩血管作用的物质，从而对血管张力有重要调节作用。低氧会使大鼠肺血管周围肥大细胞密度增加，肥大细胞释放某些介质，如组织胺等使肺血管收缩；而高原鼠兔的肺小动脉血管周围未见肥大细胞及相关免疫反应，提示其肺小动脉管壁薄可能与肥大细胞缺失有关。同时，转化生长因子-β（Transforminggrowthfactor-β,TGF-β）是一种血管重建的调节因子，低氧能刺激TGF-β的mRNA表达，在原发性肺动脉高压的患者及慢性缺氧的大鼠肺组织的肌化血管中TGF-β抗体染色呈阳性，而高原鼠兔的肺组织却没有这种反应，表明高原鼠兔在较高海拔无肺动脉高压，也缺乏此种小血管的重建过程，是一种遗传性的适应。

1.2研究目的与意义

本研究旨在通过对高原鼠兔bHPV相关基因进行比较转录组分析和初步验证，深入探究高原鼠兔适应低氧环境的分子机制。从基因层面揭示高原鼠兔bHPV的内在调控机制，有助于我们更全面地理解生物在极端环境下的适应策略，丰富和完善生物适应性进化理论。

高原鼠兔作为青藏高原生态系统的重要组成部分，对维持生态平衡起着关键作用。深入了解其适应低氧的分子机制，对于保护高原鼠兔及其生存环境具有重要的现实意义。这将为制定科学合理的生态保护政策提供理论依据，有助于维护青藏高原生态系统的稳定和生物多样性。此外，高原鼠兔对低氧环境的适应机制研究，也可能为人类高原病的防治以及相关医学研究提供新的思路和方法。例如，研究高原鼠兔在低氧环境下如何维持正常生理功能，可能为开发治疗高原反应、肺动脉高压等疾病的新药物和新疗法提供启示。

二、材料与方法

2.1实验材料

2.1.1实验动物

本研究选用健康成年的高原鼠兔作为主要研究对象，高原鼠兔均捕获自青藏高原[具体地点]的自然栖息地，捕获过程遵循动物保护和实验伦理相关规定，以确保动物福利并获取具有代表性的样本。同时，选取昆明白小鼠作为对照动物，昆明白小鼠购自[供应商名称]，实验动物生产许可证号为[具体许可证号]。所有小鼠在适应实验室环境1周后进行实验，以减少环境变化对实验结果的影响。

高原鼠兔和昆明白小鼠均饲养于温度为（22±2）℃、相对湿度为（50±10）%的动物房内，保持12h光照/12h黑暗的昼夜节律，自由摄食和饮水。实验动物的饲养管理严格按照《实验动物管理条例》进行，确保动物健康和实验条件的一致性。在实验开始前，对所有动物进行健康检查，排除患病个体，以保证实验数据的可靠性。

样本采集时，使用[具体麻醉剂名称]对高原鼠兔和昆