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实时荧光定量PCR原理

XX有限公司

20XX

汇报人：XX

目录

01

PCR技术概述

02

实时荧光定量PCR原理

03

实时荧光定量PCR设备

04

实时荧光定量PCR实验步骤

05

实时荧光定量PCR的应用实例

06

实时荧光定量PCR的挑战与前景

PCR技术概述

01

PCR技术定义

技术原理

变性复性延伸循环

PCR技术简介

体外酶促扩增DNA技术

01

02

PCR技术发展史

1971年Khorana提出核酸体外扩增设想。

早期设想提出

1985年KaryMullis发明PCR技术，成为生命科学研究常规方法。

PCR技术诞生

PCR技术应用领域

助力基因组计划，研究物种进化。

生命科学

疾病诊断治疗，病原体检测。

医疗诊断

实时荧光定量PCR原理

02

基本原理介绍

荧光染料或探针标记，产物定量

荧光定量方法

DNA等比扩增，荧光实时监测

PCR扩增原理

荧光标记技术

SYBRGreen染料

结合DNA双链发光，成本低但特异性稍弱。

TaqMan探针法

水解探针释放荧光，特异性高，用于精确定量。

定量分析方法

测定目的基因在不同样本中的含量比例，无需知道拷贝数。

相对定量

通过标准曲线测定样本中目的基因的拷贝数。

绝对定量

实时荧光定量PCR设备

03

设备组成

含热循环与光学检测

数据处理与分析

硬件模块

软件模块

设备工作流程

开机后仪器自检，进入初始界面。

开机与自检

放入样品，编写并上传运行程序至仪器。

样品放置与编程

运行程序，监控荧光信号变化。

运行与监控

设备操作要点

开启仪器及电脑，进行自检，确保设备正常。

开机与自检

编辑并保存程序，传入仪器，运行并监控。

程序编辑与运行

正确放置PCR管或板，注意干燥与密封。

样品放置

01

02

03

实时荧光定量PCR实验步骤

04

样本准备

从待测生物体中获取实验所需材料。

采集样本

对样本进行提纯、稀释等预处理，以满足实验要求。

处理样本

PCR反应体系构建

稀释模板，混匀加样，加入引物及mix。

配样与加模板

设置温度，加样至仪器，设定程序开始反应。

设置反应条件

数据收集与分析

实验结束后，从PCR仪导出qPCR数据。

收集反应数据

01

根据溶解曲线，检查数据有效性，确保结果准确可靠。

分析数据有效性

02

实时荧光定量PCR的应用实例

05

病原体检测

01

结核菌检测

实时荧光PCR高效检测结核分枝杆菌，助力结核病诊断。

02

病毒快速筛查

采用荧光PCR方法，快速筛查基孔肯雅病毒等多种病原体。

基因表达分析

01

临床疾病诊断

实时荧光定量PCR用于肝炎、艾滋病等传染病诊断和疗效评价。

02

科研基因分析

在科研中，分析特定基因表达水平，助力基因功能和疾病机制研究。

遗传性疾病诊断

快速区分地贫患者与正常人

地贫诊断应用

01

有效检测携带者及患者

脊肌萎缩症检测

02

实时荧光定量PCR的挑战与前景

06

技术挑战

需优化引物设计、退火温度等，以提高扩增效率。

反应条件优化

样品中可能存在的PCR抑制物影响反应准确性。

抑制物干扰

发展趋势

市场需求增长

疾病检测、个性化医疗需求增加，推动市场持续发展。

技术创新推动

新技术如数字PCR兴起，为市场带来新增长点。

01

02

未来应用展望

01

肿瘤早筛应用

在肿瘤早筛中，实时荧光定量PCR技术将发挥更大作用，提高检测灵敏度。

02

基层医疗普及

随着政策推动，实时荧光定量PCR技术将在基层医疗中实现更广泛应用。

谢谢

Thankyou