T_CSTM 01090-2022 T_CAIA_SHO19-2022（idt） 乙酰胆碱酯酶 活性检测 分光光度法.docxVIP

ICS71.040.30CCSG66

团体标准

T/CSTM01090—2022/T/CAIA/SHO19-2022（IDT）

乙酰胆碱酯酶活性检测分光光度法

Acetylcholinesterase-Determinationofactivity-Spectrophotometricmethod

2022-10-28发布2023-01-28实施

中关村材料试验技术联盟中国分析测试协会

发布

I

T/CSTM01090—2022/T/CAIA/SHO19-2022

前言

本文件参照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》，GB/T

20001.4-2015《标准编写规则第4部分：试验方法标准》的规定起草。

T/CSTM01090—2022与T/CAIA/SHO19-2022一致程度为等同（IDT）。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由中国材料与试验标准化委员会科学试验标准化领域委员会（CSTM/FC98）和中国分析测试协会共同提出。

本文件由中国材料与试验标准化委员会科学试验标准化领域委员会（CSTM/FC98）和中国分析测试协会共同归口。

T/CSTM01090—2022/T/CAIA/SHO19-2022

1

乙酰胆碱酯酶活性检测分光光度法

1范围

本文件规定了用分光光度法测定乙酰胆碱酯酶活性的方法。

本文件适用于有机磷与氨基甲酸酯类农药残留检测专用试剂中乙酰胆碱酯酶活性的测定，本方法定量限为0.01μmol/(mL·min)，测量范围为0.01μmol/(mL·min)~0.13μmol/(mL·min)。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6379.1测量方法与结果的准确度(正确度与精确度)第1部分：总则与定义

GB/T6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精确度)第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T26810可见分光光度计

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

乙酰胆碱酯酶活性acetylcholinesteraseactivity

在规定的反应条件下，乙酰胆碱酯酶具有催化分解碘化硫代乙酰胆碱的特性，用每毫升（或毫克）乙酰胆碱酯酶每分钟催化分解碘化硫代乙酰胆碱的微摩尔量表示。

4原理

乙酰胆碱酯酶能水解碘化硫代乙酰胆碱生成硫代胆碱和乙酸。硫代胆碱与巯基显色剂5,5-二硫代双（2-硝基苯甲酸）（DTNB）反应生成黄色化合物5-巯基-2-硝基苯甲酸（TNB），TNB在波长412nm处有特征性光吸收，测定其吸光度值；根据还原型谷胱甘肽制备标准溶液与DTNB反应，所绘制谷胱甘肽的量与吸光度关系的标准曲线，计算出乙酰胆碱酯酶的酶活性值。

5试剂

除非另有规定，本方法所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的三级水。

T/CSTM01090—2022/T/CAIA/SHO19-2022

2

5.1pH8.0磷酸缓冲液

称取33.92g磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）和0.83g磷酸二氢钠（NaH2PO4·2H2O）置于200mL烧杯中，用水溶解，转移至1000mL容量瓶中，稀释至刻度后混匀，即为pH8.00.1mol/L磷酸缓冲液。

5.2碘化硫代乙酰胆碱溶液

称取72mg碘化硫代乙酰胆碱置于带盖离心管，用10mL磷酸缓冲液（5.1）溶解，置4℃冰箱中保存，保存期不超过2天，临用时用磷酸缓冲液稀释10倍。

5.35,5-二硫代双（2-硝基苯甲酸）（DTNB）溶液

称取19.8mgDTNB置于烧杯中，用磷酸缓冲液（5.1）溶解，移入100mL容量瓶中，用磷酸缓冲液定容。应现用现配，出现明显黄色即弃用。

5.4抑制剂

吸取7μLO,O-二甲基-O-(2,2-二氯乙烯基)磷酸酯（敌敌畏）纯品（或有效含量为10mg的溶液），置于带盖离心管中，立即加入10mL丙酮溶剂，混匀，用封口膜密封保存。

5.5谷胱甘肽标准溶液

称取30.7mg还原型谷胱甘肽置于50mL烧杯中，用10mL水溶解，移入100mL容量瓶中，用水定容。此溶液lmL相当于1μmol谷胱甘