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犬小孢子菌SSH文库中差异基因解析与致病机制探究

一、引言

1.1研究背景与意义

犬小孢子菌（Microsporumcanis）是一种亲动物性皮肤癣菌，可引起人和动物的皮肤真菌病，即癣病。在全球范围内，犬小孢子菌感染是一个普遍存在的公共卫生问题，不仅对动物健康造成威胁，也给人类健康带来了潜在风险。据统计，在皮肤真菌病中，由犬小孢子菌引起的病例占比较高，尤其在儿童和宠物饲养者中更为常见。在儿童头癣病例中，犬小孢子菌作为病原菌的比例可高达48%，这不仅影响儿童的身体健康，还可能对其心理健康和生活质量产生负面影响。

深入研究犬小孢子菌SSH文库中的差异基因具有重要的理论和实际意义。从理论角度来看，差异基因的研究有助于深入了解犬小孢子菌的致病机制。通过比较不同条件下或不同菌株间基因表达的差异，可以揭示与致病性相关的关键基因及其调控网络，为阐明犬小孢子菌如何感染宿主、逃避宿主免疫防御以及引发疾病症状提供分子层面的解释，进一步丰富和完善皮肤癣菌致病的理论体系。

在实际应用方面，差异基因研究为犬小孢子菌感染的诊断、治疗和预防提供了新的靶点和思路。一方面，可作为潜在的生物标志物，用于开发更准确、快速的诊断方法，实现早期诊断和及时治疗；另一方面，针对差异基因及其编码的蛋白，可以研发新型抗真菌药物，提高治疗效果，减少耐药性的产生；差异基因研究还有助于制定更有效的预防策略，通过干预相关基因的表达或功能，降低犬小孢子菌的感染风险。

1.2犬小孢子菌概述

犬小孢子菌在显微镜下呈现出独特的形态特征。其大分生孢子呈纺锤状，壁厚且粗糙带刺，大小通常为(10-25)μm×(75-100)μm，具有6个以上的隔，顶端如同“帽子”样肥大，这是其重要的鉴别特征之一。还可见棍棒状小分生孢子，菌丝有隔，常见球拍状菌丝，有时也会出现破梳状菌丝和结节状菌丝。在直接镜检病发时，感染表现为发外型，可见圆形或卵圆形孢子密集成片而不排列成串，发内可有少量菌丝；皮屑内则可见分枝分隔的菌丝。

在培养特性上，犬小孢子菌在SDA（SabouraudDextroseAgar）培养基上25℃培养时，菌落生长较快。初期为白色至黄色绒毛样生长，2周后菌丝增多，呈羊毛状，故而又被称为羊毛状小孢子菌。此时菌丝可充满整个斜面，中央趋向粉末化，表面呈黄白色，有少数同心圆，背面红棕色，中央部显著，边缘部较浅。这种培养特性对于犬小孢子菌的分离和初步鉴定具有重要意义。

犬小孢子菌具有广泛的宿主范围，可感染犬、猫、兔等多种动物，以及人类。在世界范围内均有流行，不同地区的发病率有所差异，但总体呈上升趋势。在北美地区，100年前头癣的病原以犬小孢子菌占首位，随后奥杜昂小孢子菌占居首位，而今犬小孢子菌发病率又有上升趋势。在意大利，犬小孢子菌是头癣最主要的病原菌，占比高达90.5%。在中国，随着宠物饲养数量的增加，犬小孢子菌感染的病例也逐渐增多。

当犬小孢子菌感染人体时，可引起多种临床症状。头癣是其最为常见的临床表现，包括白癣、脓癣等。白癣常表现为头皮上出现圆形或椭圆形的灰白色鳞屑斑，病发根部有白色菌鞘，且头发易折断；脓癣则表现为头皮上出现脓肿，伴有疼痛、脱发等症状，严重影响患者的外观和生活质量。犬小孢子菌还可感染光滑皮肤及指（趾）甲，引起体癣和甲癣，但相对较为少见。体癣常表现为周边伴有鳞屑的圆形或环状红斑，混有小疱；甲癣则表现为指甲变色、增厚、变形等。对于免疫力低下的人群，如HIV患者、接受器官移植患者等，感染犬小孢子菌后可能出现多形红斑样皮损，伴有散在小丘疹，边界可不清晰，可无或稍有皮屑，症状更为复杂和严重。

犬小孢子菌感染不仅对患者的身体健康造成影响，还可能带来一系列社会和经济问题。由于其具有传染性，可在家庭、学校、宠物医院等场所传播，增加了疾病防控的难度。治疗犬小孢子菌感染需要耗费一定的医疗资源和时间，给患者家庭和社会带来经济负担。对于宠物饲养者来说，宠物感染犬小孢子菌可能导致宠物健康问题，增加宠物医疗费用，甚至可能影响宠物的饲养和交易。

1.3SSH技术原理与应用

抑制性消减杂交（SuppressionSubtractiveHybridization，SSH）技术是一种高效分离差异表达基因的方法，其原理基于抑制性PCR和消减杂交。该技术的核心步骤包括：首先，将两组不同来源的mRNA（分别称为tester和driver）反转录成cDNA；然后，用识别4碱基序列的限制性内切酶将tester和driver的cDNA酶切为小片段；接着，将testercDNA分成两份，分别连接不同的接头；随后，将两份testercDNA分别与过量的drivercDNA进行第一次杂交，使表达量相同的基因形成双链，而差异表达的基因仍保