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高频精选：引物设计考研真题及答案

单项选择题（每题2分，共10题）

1.引物设计时，引物长度一般为？

A.10-15bp

B.15-30bp

C.30-50bp

D.50-100bp

2.引物的GC含量一般在？

A.10%-20%

B.20%-40%

C.40%-60%

D.60%-80%

3.引物设计中，避免引物内部出现？

A.连续A

B.连续T

C.连续G

D.连续互补碱基

4.以下哪种软件常用于引物设计？

A.PrimerPremier

B.Photoshop

C.Word

D.Excel

5.引物与模板的退火温度一般是？

A.30-40℃

B.40-50℃

C.50-60℃

D.60-70℃

6.引物3’端不能是？

A.G

B.C

C.T

D.A

7.引物设计时，上下游引物的Tm值相差应不超过？

A.5℃

B.10℃

C.15℃

D.20℃

8.防止引物二聚体形成可通过？

A.提高引物浓度

B.降低引物浓度

C.增加引物长度

D.减少引物长度

9.引物设计要考虑模板的？

A.序列长度

B.二级结构

C.碱基种类

D.分子量

10.理想的引物设计产物片段长度一般在？

A.100-200bp

B.200-500bp

C.500-1000bp

D.1000-2000bp

答案：1.B2.C3.D4.A5.C6.D7.A8.B9.B10.B

多项选择题（每题2分，共10题）

1.引物设计的基本原则包括？

A.特异性

B.长度合适

C.GC含量合理

D.避免二聚体

2.引物设计时可参考的参数有？

A.Tm值

B.引物长度

C.碱基组成

D.产物长度

3.以下哪些会影响引物的退火效率？

A.退火温度

B.引物浓度

C.模板浓度

D.缓冲液成分

4.引物设计时要避免？

A.引物自身互补

B.引物之间互补

C.引物与非特异性序列互补

D.引物与模板完全匹配

5.提高引物特异性的方法有？

A.增加引物长度

B.优化GC含量

C.选择合适的引物对

D.提高退火温度

6.引物设计与哪些因素有关？

A.模板序列

B.实验目的

C.酶的特性

D.反应体系

7.设计引物时如何考虑扩增效率？

A.引物长度适中

B.避免引物二聚体

C.优化退火温度

D.选择合适的引物浓度

8.防止引物错配可采取？

A.使用高质量模板

B.优化引物设计

C.提高反应条件严格性

D.增加引物用量

9.引物设计的产物特点应满足？

A.单一产物

B.大小合适

C.纯度高

D.产量高

10.引物设计过程中要考虑的因素有？

A.引物的特异性

B.引物的稳定性

C.引物的扩增效率

D.引物的成本

答案：1.ABCD2.ABCD3.ABCD4.ABC5.ABCD6.ABCD7.ABCD8.ABC9.ABC10.ABCD

判断题（每题2分，共10题）

1.引物长度越长越好。（）

2.引物GC含量越高越好。（）

3.引物5’端可随意设计。（）

4.引物设计不需要考虑模板二级结构。（）

5.引物二聚体不影响扩增结果。（）

6.退火温度越高，引物特异性越强。（）

7.上下游引物Tm值相差越大越好。（）

8.引物设计只需要考虑特异性，不需要考虑扩增效率。（）

9.引物3’端碱基对扩增特异性影响不大。（）

10.产物片段长度对实验没有影响。（）

答案：1.×2.×3.×4.×5.×6.√7.×8.×9.×10.×

简答题（总4题，每题5分）

1.简述引物设计的基本步骤。

答案：先获取模板序列，再根据原则确定引物长度、GC含量等参数，避免引物内部及相互间互补，计算Tm值，通过软件设计引物，最后评估引物质量。

2.说明引物3’端的重要性。

答案：3’端碱基对引物与模板结合及扩增起始很关键，不能是A，否则易错配，影响扩增特异性和效率。

3.怎样提高引物的特异性？

答案：增加引物长度，优化GC含量，选择合适引物对，提高退火温度，避免引物自身及相互间互补，减少与非特异性序列互补。

4.简述引物设计中Tm值的意义及计算方法。

答案：Tm值反映引物与模板退火温度，合适的Tm值利于引物与模板结合。计算方法有多种，如经典公式Tm=4(G+C)+2(A+T)。

讨论题（总