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百合高效再生体系搭建及萜类合成酶基因遗传转化研究

一、引言

1.1研究背景与意义

百合（Liliumspp.）作为百合科百合属的多年生球根花卉，素有“云裳仙子”的美誉，在全球观赏植物市场中占据着举足轻重的地位。其花形优雅，花色丰富，涵盖白、粉、黄、橙等多种色调，且花香清幽宜人，具有极高的观赏价值，深受人们的喜爱。在文化层面，百合承载着丰富的寓意，如在中国，它象征着“百年好合”，常被用于婚礼等喜庆场合，寄托人们对美好生活的祝愿；在西方文化中，百合也常与纯洁、神圣等概念相关联。

除了观赏价值外，百合还具有重要的经济价值。在鲜切花市场，百合是全球重要的切花品种之一，其销售额在切花市场中名列前茅，广泛应用于花店零售、庆典装饰等领域。同时，百合的鳞茎富含蛋白质、多糖、维生素及多种矿物质，部分品种可食用，如兰州百合，口感清甜，常被用于烹饪，制作成各种美食；在药用方面，百合具有润肺止咳、清心安神等功效，是传统中医药中的常用药材。随着人们生活水平的提高和对健康养生的重视，百合在食品和医药领域的需求也在不断增加。

然而，目前百合产业的发展面临着一些挑战。传统的百合繁殖方式如分球、鳞片扦插等，繁殖系数低、速度慢，难以满足市场对百合种苗的大量需求。而且，长期的无性繁殖易导致种性退化，使百合的品质下降，如花朵变小、花色变淡、抗病性减弱等。此外，现有百合品种在香气、花色、花型及抗逆性等方面仍存在一定的局限性，难以完全满足消费者日益多样化的需求和不同环境条件下的种植要求。

建立高效的百合再生体系是解决上述问题的关键之一。通过组织培养技术建立的再生体系，能够实现百合的快速繁殖，大大提高繁殖系数，缩短繁殖周期，为百合种苗的规模化生产提供技术支持。同时，高效再生体系还能用于百合的脱毒培养，去除病毒对百合植株的危害，恢复种性，提高百合的品质。

萜类化合物是植物中一类重要的次生代谢产物，在百合中，萜类化合物不仅赋予了百合独特的香气，还在植物的生长发育、防御病虫害等方面发挥着重要作用。萜类合成酶基因是萜类化合物合成途径中的关键基因，通过对萜类合成酶基因的遗传转化，可以调控百合中萜类化合物的合成，改变百合的香气成分和含量，培育出具有独特香气的百合新品种。此外，遗传转化技术还可以将其他有益基因导入百合中，如抗病虫害基因、抗逆基因等，从而丰富百合的遗传多样性，改良百合的品种特性，提高百合的市场竞争力，推动百合产业的可持续发展。因此，开展百合高效再生体系的建立和萜类合成酶基因的遗传转化研究具有重要的理论和实践意义。

1.2国内外研究现状

百合组织培养的研究始于20世纪50年代，自1957年Robb离体培养百合鳞茎成功以来，众多学者围绕百合组织培养开展了广泛而深入的研究。在再生体系的建立方面，研究涵盖了外植体的选择、培养基类型、激素种类及浓度配比、培养条件等多个关键因素。外植体的选择范围不断扩大，包括鳞茎、叶片、花丝、花梗、鳞片、珠芽等营养器官和生殖器官。不同外植体在再生能力和培养难度上存在差异，例如，百合的鳞茎和叶片诱导不定芽的再生频率相对较高，是较为常用的外植体；而花丝、花梗等外植体在特定培养条件下也能诱导出愈伤组织并实现植株再生。

在培养基类型方面，MS培养基因其丰富的营养成分，成为百合组织培养中最常用的基本培养基，在此基础上，通过添加不同种类和浓度的植物生长调节剂，如生长素（NAA、IAA等）、细胞分裂素（BA、KT等），可以满足百合不同生长阶段的需求。众多研究表明，不同百合品种对激素的种类和浓度响应存在差异，适宜的激素配比能够显著提高外植体的诱导率、分化率和生根率。此外，培养条件如光照强度、光照时间、温度、湿度等对百合组织培养的效果也有重要影响，例如，适宜的光照强度和光照时间可以促进百合植株的光合作用和生长发育，而温度和湿度的控制则有助于维持培养环境的稳定性，减少污染和褐化现象的发生。

在百合遗传转化研究领域，自Hoshi等利用携带双元载体农杆菌EHA101piG121Hm转化百合花丝诱导的愈伤组织获得转化植株以来，遗传转化技术在百合品种改良中的应用逐渐受到关注。目前，百合遗传转化的方法主要包括农杆菌介导法、基因枪法、电激穿孔法等。农杆菌介导法因其操作简便、成本低、转化效率较高等优点，成为百合遗传转化中最常用的方法。通过农杆菌介导，多种外源基因已被成功导入百合中，如抗病基因（半夏凝集素基因、几丁质酶基因等）、抗虫基因（商陆抗病毒蛋白基因等）以及花色、花型调控基因等。然而，百合遗传转化仍面临一些问题，如转化率低、转化周期长、遗传稳定性差等，这些问题限制了遗传转化技术在百合育种中的广泛应用。

在百合萜类合成酶基因的研究方面，近年来取得了一定的进展。萜类合成酶基因是萜类化合物合成途径中的关键酶基因