CRISPR_Cas9技术介导Badh2基因编辑：粳稻香味改良的新路径.docxVIP

CRISPR/Cas9技术介导Badh2基因编辑：粳稻香味改良的新路径

一、引言

1.1研究背景与意义

粳稻（OryzasativaL.subsp.japonica）作为全球最重要的粮食作物之一，在保障粮食安全和满足人类饮食需求方面发挥着关键作用。全球约一半人口以大米为主食，而粳稻凭借其独特的口感和优良的品质，在亚洲地区，尤其是中国、日本和韩国等国家，深受消费者的喜爱。粳稻不仅是人们日常生活中的主要食物来源，还在食品加工、酿造等行业有着广泛的应用，其市场价值和经济意义不可忽视。

随着人们生活水平的不断提高，消费者对稻米品质的要求日益严苛，除了关注产量和基本营养成分外，对稻米的外观、口感、香味等品质性状也提出了更高的期望。香味作为稻米品质的重要组成部分，能够显著提升消费者的食欲和满意度，进而增强产品的市场竞争力。香稻品种在市场上往往能获得更高的价格和更好的销售前景，其经济价值相较于普通品种有显著提升。例如，印度的巴斯马蒂香米（Basmati）和泰国的茉莉香米（Jasminerice），凭借独特的香气，在国际市场上享有盛誉，价格也远高于普通稻米。

水稻香味性状主要由第8号染色体上的甜菜碱醛脱氢酶基因（Badh2）控制，当该基因发生功能丧失型突变时，会使稻米产生香味。传统的香稻育种方法主要依赖于杂交育种和诱变育种，但这些方法存在周期长、效率低、难以精准控制目标性状等缺点，在改良原有品种的香味性状时面临诸多挑战。而CRISPR/Cas9基因编辑技术作为一种新兴的基因编辑工具，具有操作简便、效率高、靶向性强等优势，能够实现对特定基因的精准修饰和改造，为水稻香味改良提供了新的技术手段。利用CRISPR/Cas9技术对Badh2基因进行编辑，有望快速、精准地改良粳稻的香味性状，缩短育种周期，提高育种效率，满足市场对高品质香稻品种的需求。

本研究旨在利用CRISPR/Cas9技术编辑Badh2基因，改良粳稻香味，具有重要的理论和实践意义。在理论方面，深入研究CRISPR/Cas9技术在粳稻香味改良中的应用，有助于揭示Badh2基因的功能和调控机制，丰富水稻分子育种的理论基础。在实践方面，通过该技术获得香味优良的粳稻品种，不仅能够提高粳稻的品质和市场竞争力，增加农民的收入，还能为消费者提供更加优质、美味的稻米产品，满足人们对美好生活的向往，对推动水稻产业的可持续发展具有重要的现实意义。

1.2国内外研究现状

近年来，利用CRISPR/Cas9技术改良粳稻香味的研究取得了显著进展。在国内，中国水稻研究所的胡培松院士团队利用CRISPR/Cas9技术，在粳稻宁粳1号遗传背景下，创制了Badh2新的等位基因系。通过对这些等位基因系的香味物质及2-乙酰基-1-吡咯啉（2-AP）进行定量分析，发现其香气适中，2-AP含量显著增加，证实了CRISPR/Cas9技术在改良粳稻香气方面的有效性。孙慧宇等人以非香型粳稻品种东农425为材料，构建了2个CRISPR/Cas9敲除载体对Badh2基因进行定点编辑，成功获得了具有不同程度香味且无转基因成分的纯合突变株系，同时考察发现突变株系的主要农艺性状与野生型相比无明显差异，为香型粳稻品种的培育提供了技术支持和材料基础。

在国外，相关研究也在积极开展。一些研究团队针对不同的粳稻品种，运用CRISPR/Cas9技术对Badh2基因进行编辑，同样取得了一定的成果。他们通过优化实验条件和靶点设计，提高了基因编辑的效率和准确性，获得了具有稳定遗传香味性状的粳稻突变体。这些研究成果为粳稻香味改良提供了宝贵的经验和借鉴。

然而，当前的研究仍存在一些不足之处。一方面，CRISPR/Cas9技术在粳稻中的编辑效率和准确性还有提升空间，部分研究中出现的脱靶效应可能会对水稻的其他性状产生潜在影响，需要进一步优化技术体系以降低风险。另一方面，对于编辑后的粳稻突变体，其香味稳定性和持久性的研究还不够深入，在不同的生长环境和种植条件下，香味性状是否能够稳定遗传和表达，还需要更多的田间试验和长期监测来验证。此外，虽然已有研究关注了突变体的主要农艺性状，但对于一些复杂的综合性状，如抗逆性、适应性等方面的研究还相对较少，这对于改良后的粳稻品种在实际生产中的推广应用具有重要影响，有待后续研究进一步完善。

1.3研究目标与内容

本研究旨在利用CRISPR/Cas9技术对粳稻中的Badh2基因进行有效编辑，从而实现粳稻香味的改良，培育出具有稳定香味性状且农艺性状优良的粳稻新品种，为香稻育种提供新的技术途径和材料资源。具体研究内容如下：

CRISPR/Cas9敲除载体的构建：根据Badh2基因的序列信息，在其关键外显子区域