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2026年生物医药研究员面试题集：实验技术与理论分析

一、实验技术操作题（共5题，每题8分）

1.题目：简述WesternBlotting实验的详细操作步骤，并说明每一步骤中关键试剂的作用及注意事项。

答案与解析：

WesternBlotting是检测蛋白质表达水平的重要技术，操作步骤如下：

1.样本制备与SDS电泳：细胞或组织裂解后，加入SDS样品缓冲液（含β-巯基乙醇）煮沸变性，通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS）分离蛋白质。关键试剂：SDS（使蛋白质变性并带负电荷）、β-巯基乙醇（断裂二硫键）、甘油（增加样本密度）。注意事项：避免样本反复冻融，防止蛋白酶降解。

2.转膜：将凝胶中的蛋白质转移至PVDF或NC膜上，使用甲醇预湿润膜（5min），再经TBST缓冲液平衡（30min）。关键试剂：甲醇（利于蛋白转移）、TBST（Tris缓冲盐缓冲液，洗膜用）。注意事项：确保转膜条件（电压、时间）适宜，防止蛋白丢失。

3.封闭：用5%脱脂奶粉或BSA封闭1-2h，防止非特异性结合。关键试剂：脱脂奶粉/BSA（封闭抗体非特异性位点）。注意事项：封闭温度需室温，避免抗体竞争结合。

4.抗体孵育：用一抗（通常1:1000稀释）孵育4-12h，二抗（辣根过氧化物酶标记，1:5000稀释）孵育1h。关键试剂：抗体（需预杂交降低非特异性）。注意事项：抗体需4℃过夜孵育以提高特异性。

5.化学发光检测：加入ECL底物显色，使用化学发光成像系统采集信号。关键试剂：ECL底物（氧化后发光）。注意事项：避免曝光时间过长，防止信号衰减。

2.题目：描述流式细胞术（FCM）的原理，并说明如何设置对照组以验证实验结果的可靠性。

答案与解析：

流式细胞术通过检测细胞荧光信号和物理特性（如大小、颗粒度）进行定量分析。原理：细胞逐个通过激光束，激发荧光染料或细胞内颗粒，探测器收集散射光和荧光信号，经数据处理生成细胞群体分布图。关键参数：荧光通道（如PE、FITC）、前向散射（FSC，细胞大小）、侧向散射（SSC，颗粒复杂度）。

对照组设置：

-阴性对照：未染色细胞，排除自发荧光干扰。

-阳性对照：已知表达目标蛋白的细胞（如用已知阳性细胞验证抗体特异性）。

-同型对照：用同型抗体（IgG）替代一抗，排除非特异性结合。

3.题目：如何进行RNA干扰（RNAi）实验？简述siRNA设计要点及优化方法。

答案与解析：

RNAi通过siRNA（小干扰RNA）诱导目标mRNA降解，抑制基因表达。操作步骤：

1.siRNA设计：选择靶基因保守区域（长度19-21nt），避免二级结构（如发夹结构），使用生物信息学工具（如RNAi设计软件）筛选低脱靶效应的siRNA。优化方法：合成多对siRNA并筛选效率最高的。

2.转染：用脂质体或化学方法将siRNA导入细胞，常用转染试剂（如Lipofectamine）。注意事项：转染效率受细胞类型影响，需优化试剂浓度。

3.验证：通过qPCR或WesternBlot检测基因表达水平。

4.题目：描述CRISPR-Cas9基因编辑的原理，并说明如何筛选成功编辑的细胞。

答案与解析：

CRISPR-Cas9通过向导RNA（gRNA）识别靶DNA位点，Cas9酶切割DNA，形成双链断裂（DSB），细胞修复时可能引入突变。操作要点：

-gRNA设计：选择靶位点（PAM序列上游20nt），确保特异性（避免脱靶）。

-递送：用电穿孔或病毒载体将Cas9/gRNA复合物导入细胞。

筛选方法：

-T7E1酶切法：检测PCR产物中断裂片段。

-测序：Sanger测序或NGS验证编辑位点。

5.题目：如何进行细胞增殖实验（如MTT或CCK-8法）？简述结果判读及影响因素。

答案与解析：

MTT实验步骤：

1.细胞接种于96孔板，加入MTT溶液（5mg/mL），37℃孵育4-6h。

2.加入DMSO裂解结晶，酶标仪测定490nm吸光度。

结果判读：吸光度越高，增殖越快。影响因素：细胞密度、培养基成分、药物毒性。

二、理论分析题（共5题，每题10分）

1.题目：解释生物标志物的概念，并举例说明其在药物研发中的意义。

答案与解析：

生物标志物是可客观量化的指标，反映疾病状态或药物作用。意义：

-早期诊断：如肿瘤标志物（PSA、CA19-9）。

-疗效监测：如HbA1c（糖尿病药物研发）。

-安全性评估：如肝功能指标（药物毒性）。

2.题目：比较PCR和qPCR在检测灵敏度和定量范围上的差异。

答案与解析：

-PCR：终点检测，无法定量，适合检测存在量较高的靶RNA。

-qPCR：实时检测，通过荧光曲线定量，灵敏度高，适合低丰度RN