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杂交瘤协议
•Gr培养杂交瘤和收集上清液：o准备杂交瘤培养基。对于TROMA‑I，建议
的培养基为：400毫升IMDM100毫升FBS0.5毫升50毫克/毫升庆大霉素
**我通常会补充青链霉素以确保安全–滚瓶非常容易受到污染。**o在
37°C水浴中解冻细胞。一旦细胞解冻，用乙醇喷洒试管（水浴很脏）。
将细胞转移到含有杂交瘤培养基的15毫升圆锥管中并离心。所有这些步
骤都要迅速进行–冷冻培养基中含有DMSO，会使细胞感到不适。o去
除培养基，用10毫升新鲜杂交瘤培养基重新悬浮沉淀物。将细胞转移到
75厘米组织培养瓶中。在显微镜下检查细胞，确保它们看起来正常，并在
培养箱中培养。o一旦它们生长良好，你可能需要每隔一天将细胞以1:2
或1:4的比例分瓶，但你应该每天检查它们。此时，你不希望培养基变得
太黄或细胞生病，因为它们会停止产生抗体。为了分瓶，从瓶子中取出所
有细胞和培养基。杂交瘤细胞可能有轻微的贴壁性，所以你可能需要稍微
一下瓶子，但不需要胰酶或刮取细胞。离心细胞，去除、过滤并
冷冻上清液，用适当体积的新鲜培养基重新悬浮细胞，并转移到新的瓶子
中。o一旦你已经扩增了足够的细胞，使你拥有2‑3个大的培养瓶（约40
毫升培养物），你应该冷冻细胞。为此，离心10^7细胞并将其重悬于0.5
毫升冷冻培养基中（可以使用含高量+10%DMSO的培养基，或直接
使用+10%DMSO的）。转移到冻存管中，并立即放置在‑80°C冰柜
中。第二天，将冻存管转移到液氮中长期保存。o继续扩增细胞。一旦你
有了大约4个准备分瓶的大培养瓶，你可以开始一个滚瓶。将其中一个培
养瓶分成2‑4个大培养瓶继续正常生长。离心另外3个培养瓶的内容物，过
滤并冷冻上清液，然后将细胞
HybridomaProtocol
•Growinghybridomaandcollectingsupernatant:
oPreparehybridoma.ForTROMA-I,thesuggestedwas:
400mlIMDM
100mlFBS
0.5ml50mg/mlgentamicin
**IusuallysupplementedthiswithPen/Steptobesafe–rollerbottget
contaminatedveryeasily.**
oThawcellsin37Cwaterbath.Assoonascellsarethawed,spraytube
withethanol(waterbathsaredirty).Transfercellstoa15mlconical
containinghybridomaandspindown.Doallofthisquickly–
freezingcontainsDMSOwhichmakesthecellsunhappy.
oRemoveandresuspendpelletin10mlfreshhybridoma.
Transfercellsto75cmtis
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